Gene Mutations - Detection of Gene Mutations

8 important questions on Gene Mutations - Detection of Gene Mutations

Hoe kunnen de resultaten op een Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) gel worden geïnterpreteerd?

  • De snelheid van migratie door de gel zegt iets over de relatieve verhouding in AT en CG verbindingen. AT migreert sneller door de gel omdat dit sneller denatureert dan CG.
  • Twee bandjes kan duiden op de aanwezigheid van twee verschillende allelen voor een bepaalde locatie. Dit geeft genetische variatie weer op die specifieke locatie. Het kan het gevolg zijn van een SNP.

Wat is ASO dot blot?

Allel specifieke oligomeer hybridisatie (ASO) is een dot blot methode.

  • Vertrouwt op bindende effecten van nucleotide-mismatches.
  • Monster in oplossing wordt gespot op nitrocellulose.
  • Gelabelde oligonucleotideprobe wordt gehybridiseerd met geïmmobiliseerd monster.
  • Drie monsters worden gespot op duplicate membranen: één membraan is blootgesteld aan de probe die complementair is aan de WT-sequentie (wt probe) en één membraan is blootgesteld aan de probe die complementair is aan de mutant-sequentie (m probe)
  • Kan SNP detecteren

Wat is het verschil tussen forward dot blot en reverse dot blot?

  • Forward dot blot: de specifieke probes worden op het membraan geïmmobiliseerd en het geteste DNA wordt geïncubeerd met het membraan.
  • Reverse dot blot: de DNA-sequenties worden geïmmobiliseerd op het membraan, vervolgens worden de specifieke probes geïncubeerd met het membraan. (met multiplex-PCR kunnen meerdere mutaties tegelijk worden getest)
Forward: membraan is drager van probes (gespot op membraan en gelabeld)
Reverse: membraan is drager van DNA (monster gespot op membraan en gelabeld)
  • Higher grades + faster learning
  • Never study anything twice
  • 100% sure, 100% understanding
Discover Study Smart

Wat is de vergelijking van dot blot, reverse dot blot en arrays?

  • Dot blot - gespotte probes
  • Reverse dot blot - gespot DNA
  • Array - geordend patroon van probes op een vaste oppervlakte.

Wat is nuclease cleavage als detectiemethode van puntmutaties?

  • Nucleasen knippen ss-bubbels in heteroduplexen
  • Regio van interesse: geamplificeerd door PCR
  • PCR-product wordt gedenatureerd en renatureerd met of zonder toegevoegd normaal PCR-product
  • Gerenatureerde duplexen worden gedigesteerd met nuclease
  • Producten worden waargenomen met gelelektroforese
  • Geknipte fragmenten geven aanwezigheid van mutatie weer

Wat is nonisotopic RNase cleavage assay (NIRCA)?

Het is gebaseerd op de selectieve enzymatische degradatie van complementaire RNA-strengen door RNase. Ss-Specific RNase enzymen knippen verschillende typen mismatches.

Wat zijn de stappen in Nuclease Cleavage?

  1. Nucleasen die enkelstrengige bellen in heteroduplexen knippen.
  2. PCR
  3. PCR-product wordt gedenatureerd en gerenatureerd met of zonder toegevoegd normaal PCR-product.
  4. Gerenatureerde duplexen worden gedigereerd met nuclease, bijvoorbeeld S1-nuclease.
  5. Gelelektroforese: geknipte fragmenten tonen de aanwezigheid van mutatie aan.

Wat is invader technology als een cleavage based methode voor de detectie van puntmutaties?

  • Mutatiedetectie met Cleavase-enzym (Flap endonuclease I) (herkent de overlappende structuur en knipt de 5'-Flap aan de primaire probe)
  • Monster wordt gemengd met probes en enzym.
  • Enzymsplitsing van de probe-testmonsterhybride zal een fluorescerend signaal opleveren.
  • Er treedt alleen een signaal op als de volgorde van de probe en het testmonster complementair zijn.

The question on the page originate from the summary of the following study material:

  • A unique study and practice tool
  • Never study anything twice again
  • Get the grades you hope for
  • 100% sure, 100% understanding
Remember faster, study better. Scientifically proven.
Trustpilot Logo