Startpagina / Samenvattingen / Class notes - 201 / eiwitten-eiwit-sds-page

PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins - analyse technieken

Q: Kun je aggragatie aantonen via massa spectrometrie?

Nee, want je moet voordat je het eiwit in de MI gaat stoppen het eerst gaan afbreken in kleinere peptiden (eiwitdigestie) dit gebeurt meestal door trypsine. trypsine breekt eiwitten af in stukjes. De informatie over de eiwit aggregatieteostand van het oorspronkelijke eiwit gaat verloren omdat het eiwit al is opgeslitst

Q: Welke uitspraakt over SDS-PAGE gevolgd door coomassie kleruing (algemene eiwit kleuring) klopt?

Aggregaten zijn meestal niet zichtbaar, omdat de monstervoorberwerking de bindingen verbreekt (n et als bij massa spectrometrie) -het klopt niet dat grote moleculen verder door de gel lopen dan kleine -het klopt ook niet dat gereduceerde igG-formuleringen altijd badjes laten zien dan niet-gereduceerd -een gefosforyleerd eiwit laat altijd een extra band zien tov het niet-gefosforyleerde eiwit.

Q: Bij SEC, op basis van wat vindt er scheiding plaats?

-hydrodynamic range : effectieve grote van de molecuul terwijl het zich door de vloeistof heen beweegt. Er vindt zich dus scheinding plaats op basis van groote. ala je hdyrodymaische straal verandert kun je ook conformatie gaan aantonen

Q: Wat is het evrschil tussen SDS-PAGE en native PAGE?

-SDS-PAGE: scheiding op base van grootte -->surfactant zorgt voor ontvouwing de eiwit wordt negatief geladen en de positieve lading gaat die neutraliseren. de meest negative blijven in het begin haken. (en daarom zijn ze ook groter) verschillen van intensiteit bandjes: aanwezigheid van suikers (verminderde de kleur). kleiner deeltjes zullen onderin tercht komen omdat ze minder sterische hindering ondervinden -Native PAGE (wordt er geen SDS toegevoegd )-->dan worden de eiwitten gescheiden op basis van grootte en lading.

Q: Waarom zou men SDS gebruiken bij SDS-PAGE?

SDS is een negatieve geladen detergens dat bindt aan eiwitten. Hierdoor ontvouwt het eiwit, hierdoor zal het eiwit een negatieve lading krijgen. Daarom zullen alle eiwitten naar de positieve pool worden getrokken en weerstand ondervinden op basis van grootte dus ook scheiden op basis van grootte.

16 belangrijke vragen over PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins - analyse technieken

Als de molecuulgewicht doormiddel van fluorecentie (ijklijn) en UV/VIs van elkaar afwijken wat kan je hieruit dan gaan concluderen

Deze afwijkingen heeft te maken met de beperkte nauwkwueigheid van de SEC wanneer je met een ijklijn werkt (scheiding op basis van hydrodynamische straal, kan het wat varieren afhanelijk van condities)

Bij een eiwit formulering bestaande uit het eiwit (100kDa) en verschillende laag moleculaire hulpstoffen vermoedt men afbraak en aggregatie. Er wordt een sample geanalyseerd met SEC gekoppeld met UV/VIS (280nm)

De eiwitformulerig bevat zeker polymeren en mogelijk afbraakproducten

Om te onderzoeken of de quaternaire structuur van een hetrotetrameer na formulering nog intact is kan je sds-page gaan gebruiken. Welke sample heb je minimaal nodig om het percentage aan eiwit dat uit elkaar is gevallen door het formuleren vast te stellen?

Sample na formuleren met DTT + sample voor formuleren met DTT

Bij HIC kan je eiwitten prima scheiden, maar daarvoor moet je wel opletten in welk oplosmiddel je de eiwitten opbrengt. Om eiwitten in toenemende mate van de kolom af te krijgen moet je ook weten hoe je de samenstelling van je eluens aanpast. Welk oplosmiddel en gradient past het beste bij hic

Oplosmiidel met hoge concentratie zout, elutie met afnemende concentratie zout.

hoge concentratiezout zorgt ervoor dat de eiwitten hydrofoob worden waardoor ze kunnen gaan hechten aan dehydrofobe stationare fase (hydrofobe interactie).

en als je eluens (vloeibare fase) een afnemende concentratie zout heeft dan is het zo dat de eiwitten los komen van de stationaire fase.
de minst hydrofobe gaan als eerst eruit (kortste retentijd)
de meest hydrofobe gaan als laatst eruit (grootste retentiijd)

Kun je deamidering met massa specxtrometrie kan gaan aantonen?

Ja want bij deamidering wordt de amidegroep gesplitst , dus dan is heb je te maken dat het gewicht minder wordt.

Kun je aggragatie aantonen via massa spectrometrie?

Nee, want je moet voordat je het eiwit in de MI gaat stoppen het eerst gaan afbreken in kleinere peptiden (eiwitdigestie) dit gebeurt meestal door trypsine.

trypsine breekt eiwitten af in stukjes.

De informatie over de eiwit aggregatieteostand van het oorspronkelijke eiwit gaat verloren omdat het eiwit al is opgeslitst

Welke uitspraakt over SDS-PAGE gevolgd door coomassie kleruing (algemene eiwit kleuring) klopt?

Aggregaten zijn meestal niet zichtbaar, omdat de monstervoorberwerking de bindingen verbreekt (net als bij massa spectrometrie)

-het klopt niet dat grote moleculen verder door de gel lopen dan kleine
-het klopt ook niet dat gereduceerde igG-formuleringen altijd badjes laten zien dan niet-gereduceerd
-een gefosforyleerd eiwit laat altijd een extra band zien tov het niet-gefosforyleerde eiwit.

Bij SEC, op basis van wat vindt er scheiding plaats?

-hydrodynamic range: effectieve grote van de molecuul terwijl het zich door de vloeistof heen beweegt. Er vindt zich dus scheinding plaats op basis van groote.

ala je hdyrodymaische straal verandert kun je ook conformatie gaan aantonen

Wat is het evrschil tussen SDS-PAGE en native PAGE?

-SDS-PAGE: scheiding op base van grootte
-->surfactant zorgt voor ontvouwing de eiwit wordt negatief geladen en de positieve lading gaat die neutraliseren.

de meest negative blijven in het begin haken. (en daarom zijn ze ook groter)

verschillen van intensiteit bandjes: aanwezigheid van suikers (verminderde de kleur).

kleiner deeltjes zullen onderin tercht komen omdat ze minder sterische hindering ondervinden
-Native PAGE (wordt er geen SDS toegevoegd)-->dan worden de eiwitten gescheiden op basis van grootte en lading.

Waarom zou men SDS gebruiken bij SDS-PAGE?

SDS is een negatieve geladen detergens dat bindt aan eiwitten. Hierdoor ontvouwt het eiwit, hierdoor zal het eiwit een negatieve lading krijgen. Daarom zullen alle eiwitten naar de positieve pool worden getrokken en weerstand ondervinden op basis van grootte dus ook scheiden op basis van grootte.

Gedenatureerde insuline bevindt zich op een hogere positie op de gel dan de native insuline, hoe komt dat?

Gedenatureerde insuline is ontvouwen en is dus grooter. Daardoor zal het dus moeilijker door de gel heen diffundreren. En dus op een hogere positie komen op de gel.

Daarnaast kan gedenatureerde insuline ook gaan aggregeren en daardoor hoger op de gel te komen.-->dan heb je te maken met aggregaten van verschillende groote, dat geeft meestal een bredere band wat te zien is op de gel.

Hoe bewijs je als iets ontleedt is in een sds-page?

Als referntie moet er ontledingsproducten van insuline worden toegevoegd.
of een marker( grootte) toe te voegen zodat je weet welke grootes er wel te detecteren waren

Sds page heeft een dikke streep wat is dat? Na het toevoegen van dtt heb je die streep niet

Het gaat om aggregaten die met zwavelbruggen is verbonden(S-S)

Wat zou je zien als afbraak producten waren tussen verhitten en niet-verhitten?

Je zou dan extra banden zien die er dan zouden leiden tot afbraakproducten.

Verwacht je dat er aggregaten heeft plaatsgevonden bij de charge die tijden het weekend buiten de koelakst stond? Kun j edat zien op SDS-PAGE?

Ne je kan dat niet zien op de SDS-PAGE dit heeft vooral te maken met het feit dat. Aggragaten die buiten de koelkast staan door de verhoogde temperatuur weer in oplossing kunnen komen.-->dan zijn het geen aggregaten meer.

Zijn hoge zoutconcentraties gunstig of ongunstig voor het oplossen van eiwitten

Ongunstig want zout die houden water vast waardoor ze niet in oplossing kunnen gaan.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

201

Bekijk samenvatting

Een unieke studie- en oefentool
Nooit meer iets twee keer studeren
Haal de cijfers waar je op hoopt
100% zeker alles onthouden

Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.

Onderwerpen die gerelateerd zijn aan PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins - analyse technieken

Studiemateriaal generieke omslagafbeelding

PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins - analyse technieken

16 belangrijke vragen over PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins - analyse technieken

Als de molecuulgewicht doormiddel van fluorecentie (ijklijn) en UV/VIs van elkaar afwijken wat kan je hieruit dan gaan concluderen

Bij een eiwit formulering bestaande uit het eiwit (100kDa) en verschillende laag moleculaire hulpstoffen vermoedt men afbraak en aggregatie. Er wordt een sample geanalyseerd met SEC gekoppeld met UV/VIS (280nm)

Om te onderzoeken of de quaternaire structuur van een hetrotetrameer na formulering nog intact is kan je sds-page gaan gebruiken. Welke sample heb je minimaal nodig om het percentage aan eiwit dat uit elkaar is gevallen door het formuleren vast te stellen?

Bij HIC kan je eiwitten prima scheiden, maar daarvoor moet je wel opletten in welk oplosmiddel je de eiwitten opbrengt. Om eiwitten in toenemende mate van de kolom af te krijgen moet je ook weten hoe je de samenstelling van je eluens aanpast. Welk oplosmiddel en gradient past het beste bij hic

Kun je deamidering met massa specxtrometrie kan gaan aantonen?

Kun je aggragatie aantonen via massa spectrometrie?

Welke uitspraakt over SDS-PAGE gevolgd door coomassie kleruing (algemene eiwit kleuring) klopt?

Bij SEC, op basis van wat vindt er scheiding plaats?

Wat is het evrschil tussen SDS-PAGE en native PAGE?

Waarom zou men SDS gebruiken bij SDS-PAGE?

Gedenatureerde insuline bevindt zich op een hogere positie op de gel dan de native insuline, hoe komt dat?

Hoe bewijs je als iets ontleedt is in een sds-page?

Sds page heeft een dikke streep wat is dat? Na het toevoegen van dtt heb je die streep niet

Wat zou je zien als afbraak producten waren tussen verhitten en niet-verhitten?

Verwacht je dat er aggregaten heeft plaatsgevonden bij de charge die tijden het weekend buiten de koelakst stond? Kun j edat zien op SDS-PAGE?

Zijn hoge zoutconcentraties gunstig of ongunstig voor het oplossen van eiwitten

Onderwerpen die gerelateerd zijn aan PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins - analyse technieken

PK/PD - PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins

Vaccins - analyse technieken - bloedstolling

Class notes - 201

Class notes - cardiovasculair

Class notes - 101

Class notes - 102

Class notes - 107

Class notes - 103

Exploring humans an introduction to the phil…

Psychologie & sociologie : basiscursus

sheets

Leren veranderen

Overheidsfinanciën

Hoofdzaken socialezekerheidsrecht

PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins - analyse technieken

16 belangrijke vragen over PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins - analyse technieken

Als de molecuulgewicht doormiddel van fluorecentie (ijklijn) en UV/VIs van elkaar afwijken wat kan je hieruit dan gaan concluderen

Bij een eiwit formulering bestaande uit het eiwit (100kDa) en verschillende laag moleculaire hulpstoffen vermoedt men afbraak en aggregatie. Er wordt een sample geanalyseerd met SEC gekoppeld met UV/VIS (280nm)

Om te onderzoeken of de quaternaire structuur van een hetrotetrameer na formulering nog intact is kan je sds-page gaan gebruiken. Welke sample heb je minimaal nodig om het percentage aan eiwit dat uit elkaar is gevallen door het formuleren vast te stellen?

Bij HIC kan je eiwitten prima scheiden, maar daarvoor moet je wel opletten in welk oplosmiddel je de eiwitten opbrengt. Om eiwitten in toenemende mate van de kolom af te krijgen moet je ook weten hoe je de samenstelling van je eluens aanpast. Welk oplosmiddel en gradient past het beste bij hic

Kun je deamidering met massa specxtrometrie kan gaan aantonen?

Kun je aggragatie aantonen via massa spectrometrie?

Welke uitspraakt over SDS-PAGE gevolgd door coomassie kleruing (algemene eiwit kleuring) klopt?

Bij SEC, op basis van wat vindt er scheiding plaats?

Wat is het evrschil tussen SDS-PAGE en native PAGE?

Waarom zou men SDS gebruiken bij SDS-PAGE?

Gedenatureerde insuline bevindt zich op een hogere positie op de gel dan de native insuline, hoe komt dat?

Hoe bewijs je als iets ontleedt is in een sds-page?

Sds page heeft een dikke streep wat is dat? Na het toevoegen van dtt heb je die streep niet

Wat zou je zien als afbraak producten waren tussen verhitten en niet-verhitten?

Verwacht je dat er aggregaten heeft plaatsgevonden bij de charge die tijden het weekend buiten de koelakst stond? Kun j edat zien op SDS-PAGE?

Zijn hoge zoutconcentraties gunstig of ongunstig voor het oplossen van eiwitten

Onderwerpen die gerelateerd zijn aan PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins - analyse technieken

PK/PD - PK/PD van biologicals: toedieningsroutes en toedieningsvormen - vaccins

Vaccins - analyse technieken - bloedstolling

Samenvattingen die gerelateerd zijn aan Structuur en stabiliteit

Class notes - 201

Class notes - cardiovasculair

Class notes - 101

Class notes - 102

Class notes - 107

Class notes - 103

Exploring humans an introduction to the phil…

Psychologie & sociologie : basiscursus

sheets

Leren veranderen

Overheidsfinanciën

Hoofdzaken socialezekerheidsrecht