Flashcards - studieboek
8 belangrijke vragen over Flashcards - studieboek
Wat zijn eigenschappen van gelfiltratie chromatografie?
- Kolom packing bestaat uit porose beads
- beads size and porous size determine retention time of molecules based on size
- Grote moleculen gaan sneller door de kolom heen door de porouse gaten in de beads te ontwijken terwijl kleine moleculen hierdoor een langere weg moeten afleggen
- Scheiding op basis van grootte
Wat is een fysieke omschrijving van Ion exchange chromatografie?
- Stationaire fase bestaat uit packing van beads met geioniseerde groepen aan de oppervlak
- Twee typen
- Kationenwisselaar (S-type), bestaat uit negatief geladen groepen. Carbonic acid
- Anionenwisselaar (Q-type), bestaat uit positief geladen groepen. Quartenary ammonia
- Eiwitten worden in oplossing van zout of pH gradient geelueerd in fracties
Wat is het principe van ion exchange chromatografie?
- Scheiding gebaseerd in IEP (isoelectric point)
- Eiwitten hebben geen eigen IEP dus pH van de buffer is essentieel
- Een eiwit met een hoge pI zal bij een neutrale pH positief zijn geladen
- pH van de solutie bepaald welke eiwitten loskomen en welke niet. Door de zout concentraties te verhogen vind er ion uitwisseling plaats en elueren bepaalde eiwitten
- Sterk gebonden moleculen kunnen worden losgekoppeld door een hoge concentratie zout door de kolom te spoelen
- Hogere cijfers + sneller leren
- Niets twee keer studeren
- 100% zeker alles onthouden
Wat is het principe van affiniteit chromatografie?
- Scheiding gebaseerd op biologische specificiteit of affiniteit
- Dure techniek met lage capaciteit maar zeer specifiek dus hoge resolutie
- Beads worden gecoat met een ligand, antilichaam of enzym substraat
- Ag-Ab binding wordt verbroken door de pH te veranderen, of heel hoog of laag, zout of een detergent
Hoe wordt de binding tussen antilichaam en eiwit vervolgens weer verbroken?
Wat is het principe van metal-chelate chromatografie?
- Lading afhankelijke affiniteit van specifieke amino zuren om te binden aan metaal ionen
- 6x His tagged eiwitten binden met Ni2+ ionen gecoat op beads in een kolom. Bij een pH van boven de 7,0 sterke binding en een pH onder de 4,5 koppelt ze weer los
- Loskoppeling vind dus weer plaats door pH te verlagen of door imidazole toe te voegen die competitief bind met Ni2+
Op welke andere manieren naast zout kan precipitatie worden geinduceerd?
- pH verandering
- temperatuur verandering
- organische oplosmiddelen zoals ethanol of aceton
- op 0 graden celcius om schade aan de eiwitten te voorkomen
- polymeren (polyethylene, glycol, PEG)
Wat is het principe van kolom chromatografie?
De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:
- Een unieke studie- en oefentool
- Nooit meer iets twee keer studeren
- Haal de cijfers waar je op hoopt
- 100% zeker alles onthouden