Principes en detectiemethoden van de real-time PCR - qPCR detectie is gebaseerd op fluorescentie

5 belangrijke vragen over Principes en detectiemethoden van de real-time PCR - qPCR detectie is gebaseerd op fluorescentie

Hoe kan een fluorchroom licht uitstralen?

Een fluorchroom bevindt zich eerst in de grondtoestant, het molecuul neemt vervolgens licht energie op (excitatie), dit zorgt ervoor dat het fluorchroom in een hogere energietoestand komt, het molecuul wilt weer terugkeren naar het oorspronkelijke energie niveau en hier zal dus de opgenomen energie weer vrijkomen in de vorm van licht (emissie).

Wat is het verschil tussen excitatie en emissie?

Excitatie is het opnemen van licht door het fluorchroom en emissie is het uitstralen van licht.

Wat is de reden dat de golflengte van het licht dat het fluorochroom exciteerd (opneemt) anders is als de golflgente van het licht dat wordt ge-emiteerd (uitstraalt)?

Dit komt omdat er tijdens het proces van excitatie en emissie van het fluorchroom een gedeelte van de energie verloren zal gaan.
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Hoe kan er door de qPCR apparaat uiteindelijk worden gemeten hoeveel PCR-product er gevormd is tijdens elke PCR-cyclus?

Dit kan doordat het qPCR appraat na elke cyclus het reactie vaatje belicht om de gevormde fluorescentie te meten. Daarvoor zitten er dus een lichtbron en een detectie gedeelte in het apparaat.

Hoe wordt er voor gezorgd dat de er geen fluorescentie wordt gedetecteerd als er geen PCR-product gevormd is?

Hiervoor wordt er gebruikt gemaakt van FRET (fluorescence Resonance Energy Transfer). Dit houd in dat de energie van een fluorschroom naar een andere molecuul kan worden overgedragen. De probes die tijdens de qPCR worden gebruikt bevatten daarom ook een quencher. Dit is een molecuul dat de fluorescentie uitdooft. Waardoor er fluoriscentie wordt waargenomen op het moment dat er geen PCR product is gevormd.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo