Startpagina / Samenvattingen / Basisprincipes van de PCR / pcr-conventioneel-qpcr

Principes en detectiemethoden van de real-time PCR

5 belangrijke vragen over Principes en detectiemethoden van de real-time PCR

Wat is het verschil tussen qPCR en conventionele PCR?

Bij de conventionele PCR wordt er genalyseert op de vorming van PCR product. Bij de qPCR wordt er tijdens of na elke cyclus gekeken of er product is ontstaan.

Wat zijn kenmerken van SYBER green ?

Bindt niet aan enkelstrengs DNA alleen aan dsDNA
In ongebonden toestand absorbeert hij nauwelijks.
Heeft geen voorkeur voor een sequentie en zal aan elk ontstane PCR product binden

Op welke manier kan er worden bekeken of er verschillende PCR producten zijn ontstaan?

Dit kan worden bekeken door een smeltcurve te maken. Elk ontstane dsDNA-PCR-fragment zal namelijk een eigen unieke smelttemperatuur hebben.

Welke eisen zitten er aan het ontwerpen van een probe?

Probes hebben een GC gehalte van 40-60%
Geen herhalingen van G of C
Lengte van 15-40bp
Zo min mogelijk intra moleculaire complementaire basen waardoor haarspeld structuur kan ontstaan (alleen bij molecular beacon)
Zo min mogelijk inter moleculaire complementaire waardoor er geen primer dimers kunnen ontstaan
Tm van probe is 5-10 graden hoger dan de Tm van de primers

Waarom moet de Tm van de probe 5-10 graden hoger liggen dan de tm van de primers?

Dit komt doordat de probe dan kan binden voordat de primers aan het target binden en Taq polymerase met de DNA synthese zal starten en de probe dus niet kan binden.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

Basisprincipes van de PCR | 9789077423974

Bekijk samenvatting

Een unieke studie- en oefentool
Nooit meer iets twee keer studeren
Haal de cijfers waar je op hoopt
100% zeker alles onthouden

Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.

Onderwerpen die gerelateerd zijn aan Principes en detectiemethoden van de real-time PCR