Detectie, analyse, kwantificering van de qPCR - qPCR data analyse: smeltcurve
3 belangrijke vragen over Detectie, analyse, kwantificering van de qPCR - qPCR data analyse: smeltcurve
Wat is het effect van de hoeveelheid target DNA op het ontstaan van een primer dimer?
Wanneer er veel target DNA aanwezig is zal er veel specifiek PCR product ontstaan en relatief weinig primer dimer, wanneer er weinig target DNA aanwezig is zal er wel meer specifiek pcr product ontstaan maar ook wel meer primer dimers. Als er nauwelijks of geen target DNA aanwezig is zal er eigenlijk alleen maar primer dimers ontstaan en geen specifiek pcr product
Hoe kan je aan de hand van een smeltcurve achterhalen of er ook andere producten zijn ontstaan?
Dit kan aan de hand van de Tm temperaturen die worden bepaald door de temperatuur steeds verder te verhogen zodat de dsDNA langzaam denatureren. Elk stuk DNA heeft namelijk een unieke Tm temperatuur. Wanneer er dus meerdere producten zijn gevormd zullen er meerdere smeltpieken waar te nemen zijn. Wanneer er maar 1 product is gevormd zullen alle pieken rond dezelfde Tm zitten en weet je dat de PCR reactie is gelukt.
Waarom zullen primer dimers op een smeltcurve lagere Tm hebben dan het specifieke PCR product?
Dit komt doordat primer-dimeren kleiner zijn dan het specifieke PCR-product wat tot gevolg heeft dat deze dus een lagere Tm hebben voordat ze denatureren.
De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:
- Een unieke studie- en oefentool
- Nooit meer iets twee keer studeren
- Haal de cijfers waar je op hoopt
- 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
