Luciferase

8 belangrijke vragen over Luciferase

Hoe werken luciferases? / hoe gaat de bioluminescencie?

bioluminescencie wordt geregeld door de luciferases. Ze katalyseren de oxidatieve decarboxylatie van luciferine, waarbij licht vrijkomt. Deze reactie gebeurt in meerdere stappen en is afhankelijk van zuurstof en ATP. Allereerst wordt luciferine geadenyleerd. Dan wordt het geoxideerd waardoor er oxyluciferine ontstaat. Door het verval van oxyluciferine komt er licht vrij. De spectrale kwaliteit van dit licht (het gaat van geel/groen tot rood) is afhankelijk van het soort luciferase aanwezig is (de conformatie hiervan).

Wat is het verschil tussen fluorescentie en chemiluminescencie?

Bij fluorescentie wordt er eerst licht geabsorbeerd van een lichtbron en dan uitgezonden als licht. Bij reacties zoals met luciferase komt de energie uit een chemische reactie.

Wat is de eerste complicatie die optreedt bij de toepassingen van luciferase?

Een vuurvliegluciferasegen kan niet meteen in een ander organisme worden gebracht. Daarom moet de codonvolgorden herschreven worden voor het organisme waar men in geinteresseerd is.
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Hoe kan luciferine in het weefsel van de gastheer terecht komen?

De meeste celtypen nemen luciferine heel gemakkelijk op, waardoor het gemakkelijk in het dieet (of in de culture) kan worden gelegd. Een alternatief is om een biosynthetische operon in de gastheer tot expressie te laten brengen, zodat luciferine intracellulair tot expressie komt. (een operon is een unit bestaande uit verbonden genen waarvan wordt gedacht dat het andere genen reguleert die voor de eiwitsynthese verantwoordelijk zijn.

Wat zijn andere factoren die van belang zijn bij de toepassingen van luciferine? en hoe wordt dit genormaliseerd?

De hoeveelheid zuurstof en ATP. Maar ook de celgrootte, aantal cellen en de celdood. Dit kan worden genormaliseerd door een tweede gen te introduceren. Dit is meestal een gen waarvan men weet hoeveel het tot expressie komt (dit is ook constant meestal). Voorbeelden zijn de housekeeping genen; beta-actine of glyceraldehyde dehydrogenase. Deze genen worden ook veel gebruikt om de totale hoeveelheid RNA of eiwit onder controle te houden bij western blotting of RT-PCR.

Hoe gaat de ex vivo benadering?

Het kan ook in vitro. Dit kan door de cellen die luciferase produceren te lyseren. De hoeveelheid luciferase kan dan worden bepaald door een bepaalde concentratie ATP en zuurstof toe te voegen. En dan de bioluminescentiereactie te volgen. De toevoeging van coenzym A aan het mengsel kan de hoeveelheid licht verhogen omdat zonder dit luciferase aan het oxyluciferine complex blijft zitten en zo een remmend effect op de hoeveelheid licht heeft.

Dus wat is een simpel voorbeeld van een toepassing van luciferase?

- promoter aan het luciferasegen vastmaken.
- Dit in een bepaald celtype introduceren.
- luciferine toevoegen
- De hoeveelheid licht meten om celactiviteiten na te gaan.

Wat is het verschil tussen GFP en luciferase?

luciferase is goed voor kwantificatie door gebruik van zuurstof en ATP.
GFP is veel helderder licht waardoor het beter zichtbaar is.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo