Startpagina / Samenvattingen / Biologie 21P lesstof / bloedcellen-rode-lyseren

Bloed - Flowcytometrie - Protocol begrijpen

6 belangrijke vragen over Bloed - Flowcytometrie - Protocol begrijpen

Waarom is bij flowcytometrie de permeabilisatiestap niet nodig?

De CD-markers die bij de flowcytometrie worden gelabeld zitten op het celmembraan. De antistoffen met het fluorchroom hoeven nu dus niet door het celmembraan heen

Waarom gebruik je een RBC lysis buffer?

Voor de analyse wordt volbloed gebruikt. Hier zitten ook rode bloedcellen in. Die rode bloedcellen wil je niet meenemen in de analyse dus moeten die rode bloedcellen worden gelyseerd. Dit gebeurt in meerdere stappen van lyseren en centrifugeren.

Waarom was je de pellet uiteindelijk in een FACS-buffer?

Deze wordt gebruikt om niet-specificieke bindingen van de antilichamen te verhelpen/te minimaliseren. De grote eiwitten (PBS/FBS) gaan namelijk op de niet specifieke plekken zitten waardoor antilichamen daar niet meer kunnen binden.

Waarom wordt er EDTA toegevoegd aan de FACS-buffer?

Dit voorkomt cel aan cel adhesie en zorgt voorkomt klontering

Waarom centrifugeer je na het lyseren van de RBC?

Na het lyseren zitten er allemaal kapot gemaakte rode bloedcellen en stoffen uit deze rode bloedcellen in het mengsel. Dit wil je eruit hebben en hiervoor kun je centrifugeren. De witte bloedcellen gaan dan in het pellet zitten en de rest van het afval kan je weggieten.

Waarom centrifugeer je na het wassen met de FACS-buffer?

Dit zorgt ervoor dat cellen nog een keertje gewassen worden, zodat echt alles helemaal in FACS buffer zit en je nogmaals moet resuspenderen om de single cell suspension te krijgen.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

Biologie 21P lesstof

Bekijk samenvatting