ELISA - Protocol begrijpen

13 belangrijke vragen over ELISA - Protocol begrijpen

Stel je vergeet na de voorcoating de wasstap (wasstap 1), wat zou het effect dan zijn op het te meten signaal?

Er zijn dan nog veel ongebonden coatings aanwezig in je well. Deze ongebonden coatingen kunnen echter wel binden aan een antigeen. Deze loszwevende antigeen-antistof worden bij de tweede wasstap echter wel weggewassen. Hierdoor zou je bij de detectie uiteindelijk een lager signaal moeten krijgen.

Waarom krijg je een lager signaal als je na de voorcoating een wasstap vergeet?

Dit komt doordat de antigenen niet alleen aan de gebonden coating antilichamen binden maar ook aan de ongebonden coating antilichamen. We weten niet hoeveel antigenen er in het patientenserum zitten dus de kans is groot dat niet alle gebonden coatingen zullen binden aan een antigeen in het patientenserum. Wanneer je dus de ongebonden coatingen waar dan wel een antigeen aan is gekoppeld weg wast bij wasstap 2. Krijg je een lager signaal.

Wat gebeurt er met de resultaten als iemand vergeet om te wassen na het incuberen met het detectie-antilichaam (derde wasstap)?

Het detectie-antilichaam wordt in overmaat aangeboden, maar alles wat niet gebonden is aan het IgM moet wel worden weggewassen. Wanneer dit niet gebeurt is er teveel ongebonden vrij detectie antilichaam wat gaat zorgen voor een te hoog signaal.
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Veranderd het eindresultaat als iemand meer detectie-antilichaam toevoegt?

Nee, dit wordt al in overmaat aangeboden en alles wat niet gebonden is zal niet meer binden en uiteindelijk worden weggewassen.

Waarom mag je de wells tussen de wasstappen door nooit droog laten vallen?

Aan de wand van de welletjes zitten antilichamen gebonden. Dit zijn eiwitten en wanneer die droog zouden vallen gaan ze denatureren en kunnen ze hun werk niet meer doen.

Wat gebeurt er als je te weinig antilichaam gebruikt bij de voorcoating?

Wanneer je te weinig antilichaam gebruikt zullen er kale plekken overblijven. Wanneer je dan geen blocking-buffer gebruikt kan dit uiteindelijk leiden tot een vals positieve reactie doordat de kans op niet specifieke bindingen dan veel groter is.

Waarom kan je voor de wasstappen wel een multichannel pipet gebruiken maar voor alle andere pipetteer stappen niet?

De multichannel pipet is minder nauwkeurig en kan je dus voor het wassen wel gebruiken maar voor de andere stappen moet er precies gepipetteerd worden en kun je dit dus niet doen met de multichannel

Waarom verdun je met PBS/BSA?

BSA is een groot eiwit wat ervoor zorgt dat de kans op niet specifieke bindingen wordt verkleind en PBS zorgt ervoor dat de eiwitten in de oplossing beter stabiliseren.

Waarom gebruik je als wasstap een PBS/tween20?

Tween20 zorgt er net als BSA voor dat lege bindingsplaatsen worden geblokkeerd.

Waarom wordt er bij 37 graden geincubeerd?

Er wordt gewerkt met lichaamsstoffen. In het lichaam werken deze in een temperatuur van ongeveer 37 graden, dus om de reactie het best te laten verlopen wordt er ook geincubeerd in 37 graden.

Wat zou er gebeuren als men vergeet te wassen na het incuberen met patiënten serum (wasstap 2)?

Wanneer men vergeet te binden blijven er ongebonden antigenen die zich in het patientenserum bevinden achter in de welletjes. Wanneer er dan een detectie antilichaam wordt toegevoegd binden deze ook aan ongebonden antigenen. Daardoor kan het wel voorkomen dat er te weinig detectie antilichamen binden aan de wel gebonden antigenen waardoor het signaal uiteindelijk lager kan uitvallen dan verwacht.

Hoe kan de reactie na incuberen met OPD-substraat worden gestopt?

Dit wordt gedaan door het toevoegen van H2SO4 waardoor de enzymen worden uitgeschakeld en de reactie stopt en de absorbantie op 490 nm kan worden gemeten.

Waarom maak je per sample drie verschillende verdunningen?

Dit om te kijken of de kleur intensiteit afneemt op het moment dat je een grote verdunning aan serum gebruikt.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo