Startpagina / Samenvattingen / Campbell Biology (Nederlands) / pcr-dna-gekopieerd

DNA technologie - DNA versterken (PCR)

Q: Wat zijn de stappen van de PCR techniek?

Denaturatie: Als eerst wordt het stuk DNA molecuul verhit tot 95 graden om er twee enkele strengen van te maken Annealing: Vervolgens worden ze afgekoeld tot 52 graden om waterstofbruggen te laten vormen met primers aan de uiteindes van de DNA segmenten die gekopieerd moeten worden. (de primers hebben een zelfde restrictie-site als de vector die gekloneerd moet worden zodat de primers in dit DNA geplaatst kunnen worden) Extension: Vervolgens worden het weer iets verhit tot 75 graden, de primers worden door deze temperatuur verlengt en worden er weer twee strengen van gemaakt. Die vervolgens dan weer door stap 1 kan worden gescheiden. Vervolgens wordt het product bewaard op 4 graden celcius.

5 belangrijke vragen over DNA technologie - DNA versterken (PCR)

Wat zijn de stappen van de PCR techniek?

Denaturatie: Als eerst wordt het stuk DNA molecuul verhit tot 95 graden om er twee enkele strengen van te maken
Annealing: Vervolgens worden ze afgekoeld tot 52 graden om waterstofbruggen te laten vormen met primers aan de uiteindes van de DNA segmenten die gekopieerd moeten worden. (de primers hebben een zelfde restrictie-site als de vector die gekloneerd moet worden zodat de primers in dit DNA geplaatst kunnen worden)
Extension: Vervolgens worden het weer iets verhit tot 75 graden, de primers worden door deze temperatuur verlengt en worden er weer twee strengen van gemaakt. Die vervolgens dan weer door stap 1 kan worden gescheiden.
Vervolgens wordt het product bewaard op 4 graden celcius.

Hoe kan het zijn dat het PCR proces automatisch door blijft gaan?

Dit komt door het ontdekken van het DNA-polymerase enzym genaamd Taq-polymerase. Dit is een enzym dat kan functioneren bij hoge temperaturen tot 95 graden celcius.

Waarom kan PCR geen vervanging zijn voor het kloneren van genen in cellen?

Dit komt doordat de gebruikte polymeren geen proefleesfunctie hebben en incidenteel fouten tijdens de PCR-replicatie het aantal goede kopieën en de lengte van DNA-fragmenten die kunnen worden gekopieerd dan dus beperken.