Startpagina / Samenvattingen / Class notes - Biotechnologie / aminuzuur-frameshift-fusietags

Flashcards - Les Flashcards

6 belangrijke vragen over Flashcards - Les Flashcards

Wat zijn de verschillende soorten mutaties?

Substitutie

Silent (geen aminuzuur verandering)
Missense (verandering aminuzuur)
Nonsense (vorming stop codon)

Insertie of deletie

Frameshift missense (elk volgend aminozuur veranderd)
Frameshift nonsense (directe stop codon)
Insertie of deletie van 3 nucleotiden wat leid tot geen grote verandering of frame shift

Beschrijf het principe van oligonucleotide-direct mutagenesis

Door een vector te denatureren en een primer te laten binden met een puntmutatie wordt er een mutatie ingebouwd in het derde cyclus van PCR amplificatie. Je kan zo inserties of deleties doen

Wat is een reportergen als fusie eiwit?

Twee genen in hetzelfde ORF gekloneerd waardoor ze aan elkaar geplakt worden

Wat zijn toepassingen voor fusietags?

Reporters (bvb GFP, luciferase)
Zuivering (epitode tag voor antilichaam binding of enzym ligand)
Signaalsequenties voor sortering of secretie

uitscheiding
intracellulaire sorting

Verbeterde oplosbaarheid van eiwitproduct
Specifieke research toepassingen
Verhogen stabiliteit eiwit product

tijdens productie
tijdens toepassing product

targeting (biopharmeceuticals)

Hoe verwijder je een tag?

Chemisch of enzymatisch
Enzymatisch:

proteolytische site = specifieke aminozuur volgorde als herkennings plaats voor protease

Hoe vind productie plaats van recombinant insuline?

A en B sub units apart geproduceerd (c unit niet)
Zuivering doormiddel van beta-galactosidase tag (= LacZ) en affiniteits chromotografie
Chemische cleavage tag
chemisch samenvoegen sub units (S-S bruggen)