Samenvatting: Dna-Technologie 2

Lees hier de samenvatting en de meest belangrijke oefenvragen van DNA-technologie 2

• 0 Mutaties en het ontstaan van kanker

  Dit is een preview. Er zijn 9 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 0
  Laat hier meer flashcards zien

• 0.9 Doelgerichte therapieën, nieuwe wapens in de strijd

  Dit is een preview. Er zijn 3 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 0.9
  Laat hier meer flashcards zien

• Hoe ontstaat een monoklonaal AL (mab)

  Mab w aangemaakt door 1 kloon van B-lymfocyt en binden op slechts 1 epithoop.

• Hoe werken monoklonale AL (mabs) als geneesmiddel tegen kanker

   
  4 verschillende manieren om mabs in te zetten 
  

  • AG merker 
  • zichtbaar maken voor immuunsysteem
  • groeifactoren blokkeren waar kankercellen extra kopien v maken , waarvan ze sneller gaan groeien 
  • belemmeren van angiogenese in tumoren 
  • hierdoor blijven ze klein of krimpen zelf
  • laten afsterven van bloedvaten in de tumor die voor voeding en zuurstof zorgen voor de tumorcel 
  • mab kan radioactief deeltje binden 
  • hierdoor beschadig je enkel de tumorcel met stralingen en neit de gezonde cellen 

• 1 gebruik van E. Coli stammen en restrictie enzymen in klassieke kloneringsmethoden

• 1.1 restrictie enzymen, algemene inleiding

  Dit is een preview. Er zijn 1 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1.1
  Laat hier meer flashcards zien

• Wat heb je nodig bij het creeren van recombinant plasmide

  • Plasmide  = vector
  • insert
  • T4 DNA ligase
  • aan elkaar plakken insert en vector 
  • gastheer
  • vaak E. Coli
  • restrictie enzym 
  • = endonuclease 
  • cirkel 

• 1.2.3 voorkomen en biologische rol

  Dit is een preview. Er zijn 2 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1.2.3
  Laat hier meer flashcards zien

• Hoe eigen DNA tegen afbraak beschermen

  Dit gebeurd door een specifieke methylase, die dezelfde sequentie herkent als het restrictie enzym 
  bv. BamHI restrictie enzym en BamHI methylatie enzym

• Zuiveren van restrictie enzymen

  Vroeger
  

  • ervan uitgegaan dat het producerende organisme voor zuivering zorgt 

  nu 
  

  • genen die coderen voor restrictie enzym zullen via hun corresponderende methylase in E.Coli gekloneerd worden op sterke expressievectoren  

• 1.2.8 invloed van omgevende sequentie op knip efficientie

• Een algemeen verschijnsel is de moeilijkheid om eindstandige restrictieplaatsen volledig te verknippen. Wat is hier meestal voor nodig?

  • Grotere hoeveelheid enzyme 
    
  • of langere incubatietijd

• Waarbij is de invloed van de omgevende sequentie op de knip efficientie van belang?

  Bij het ontwerpen van primers die een RE herkenningsplaats  bevatten en na PCR amplificatie moeten geknipt worden

• 1.2.9 manieren van knippen van de herkende sequentie

• E coli stammen geburikt in het lab bevatten een deletie in hun genen coderend voor het RE van het 2de type bv EcoRI indien dit niet het geval is zou een plasmide met de EcoRI site bij het binnenkomen in de E coli stam verknipt w waarom is dit geen probleem voor de BamHI , KpnI en BgII?

  Gen coderend voor dit enzym komt in een andere bacterie voor

• 1.3.3 temperatuur

• Welke temperatuur is optimaal

  37°C meestal 
  bij thermofiele organismen wordt gekozen voor 65°C

• 1.3.5 stoppen van de reactie

• 3 methoden voor het stoppen van een reactie (het enzym laten stoppen)

  • Hitte inaktivatie 
    
  • werkt niet voor thermofiele enzymen 
  • fenol extractie van het reactie mengsel
  • gevolgd door ethanol precipitatie van het DNA 
  • werken met een kolom 
  • DNA afzonderen van zijn eersste enzym en eerste buffer