Startpagina / Samenvattingen / Class notes - EDCC / kast-lucht-antibiotica

Cel-en Weefselkweek

34 belangrijke vragen over Cel-en Weefselkweek

Wat zijn de Hela cellijn?

- zijn van onsterfelijk humane cellijn en ze kunnen oneindig delen zolang in de kweekomstandigheden dit toestaan.
- zijn een baarmoederhalskanker

Wat is die tissue engineering ?

Bijvoorbeeld : gebruiken een stamcellen van de patient.
biomedische techniek om weefsel van een bepaalde orgaan te regenereren ( opnieuw gebruiken )

Wat zijn de voordelen van primaire cultuur?

Zijn instabiel kan de celtypes veranderen naamate de cel langer in cultuur blijven
ze kunnen beperkt aantal keer doorgezet worden.

Wat doet EDTA en trypsine?

EDTA helpt bij de cellen beter los te mkaen en het vangt de calcium weg.
Trypsine: maakt de cellen los die zijn gehecht aan de wand en aan elkaar

Hoe wordt de cellen doorgezet ?

1. Oud medium verwijderen
2. Cellen wassen met PBS
3. Trypsiniseren (niet te lang, anders blijft het de uitwendige eiwitten van de cel knippen!)
4. Trypsine inactiveren door toevoegen nieuw medium met serum
5. Deel van de cellen overbrengen in nieuwe kweekfles
6. Aanvullen met vers medium, 37o C of kamertemperatuur (Bij het doorzetten van niet-hechtende cellen heb je alleen de laatste twee stappen nodig. Een extra stap kan nog zijn om al het oude medium te verwijderen door middel van centrifugatie).

Wat kan gebeuren als je te veel de cellen doorgezet hebt?

Cellijn kan sterven
de cellijn gaat over de centinue cellijn

Tijdens de eerste passages worden fracties in ampullen ingevroren, omdat er een de continue cellijnen nog steeds veranderingen plaats vinden. Nadelen:

- groeisnelheid wordt afgenomen
verandering morfologie

Welke deeltjes worden tegengehouden met HEPA filter?

Deeltjes die groter dan 0,3 mm

Wat is collageen en door wat wordt het gemaakt?

Vezelachtig eiwitten die voorkomt in meercellig organismen
door cellen van bindweefsel (bijvoorbeeld: fibroblasten)

Wat deed Harrisson in 1907?

voor het eerst weefselcultures te maken. hij plantte stukjes zenuwweefsel van kikkers.

Wat zijn elastische vezel en wat is de functie:

Weefsels zoals huid, longen, bloedvatten
het zorgt voor rekbaarheid
het voornaamst component van elastische verzels is elastine,

Wat is de functie van fibronectine ( het is een van de eiwitten?

Het speelt een rol bij de interactie tussen cellen en componenten van de extracellulaire matrix

Wat deed Alexis Carrel?

hij was de eerste die steriel kon werken

Tissue culture treated

Kweekmateriaal wordt gecoat en behandeld, zodat cellen er beter aan hechten. In feite voeg je met het coaten een extracellulaire matrix toe aan het kweekmateriaal

Receptoren en celadhesie moleculen

zorgen voor de specifieke interacties van de cellen met de extracellulaire matrix

Noem vijf voorbeelde van wat het effect kan zijn van een antibiotica:

1. de eiwitsynthese verstoren
2. de DNA synthese remmen
3. de bouw van de celmembraan verstoren
4. de permeabiliteit van de celmembraan verstoren
5. de werking van een bepaald enzym verstoren

Waar wordt antibiotica ipv van bacterieremmers nog meer voor gebruikt bij celkweek?

voor selectiemarker
de antibiotica die hier vaak voor gebruikt worden zijn:
1. hygromycine
2. neomycine
3. zeocine

Noem vier nadelen van het gebruik van antibiotica bij celkweek?

1. mogelijke kleine besmettingen met bacteriën die worden geremd maar niet gedood door de antibiotica, worden gemaskeerd
2. mycoplasma infecties kunnen ook gemaskeerd worden door antibiotica
3. er zijn antibiotica die een negatief effect hebben op het metabolisme van de cel
4. ze bevorderen onzorgvuldig werken als het aankomt op steriliteit

Wat zijn aanwijzingen voor aanwezigheid van besmetting in een celkweek?

1. plotselinge daling of stijging van de pH.
2. wolken in het medium.
3. morfologische veranderingen aan cellen zoals afronden en loslaten van de bodem.
4. bij een hoge vergroting zijn bacteriën met de microscoop te zien.

Wat gebeurt er als de kweek besmet is met een mycoplasma?

dan is de enige aanwijzing een algehele verslechtering van de cellen in de kweek.

Wat is een goede detectiemethode voor mycoplasmas?

de Hoechst kleuring

Wat is de Hoechst kleuring?

dat is een deeltje dat specifiek bindt aan DNA en fluorescerend licht uitzendt. Omdat mycoplasma ook DNA bevatten kleuren deze ook als vlekkerig kleurenpatroon

Hoe wordt getest op een virus in een celkweek?

m.b.v. ELISA-systeem

Hoe verwijder je een microbiële besmetting?

1. identificeer de aard van het organsime
2. zoek de juiste antibioticum
3. was de kweek een aantal keer door te spoelen of door te centrifugeren
4. Laat de kweek gedurende 3 passages groeien in aanwezigheid van en daarna 3 passages in afwezigheid van het antibioticum

Hoe verwijder je een mycoplasma besmetting?

met de middelen tylosine en MRA.

Hoe verwijder je een virus besmetting?

dat kan tot op heden niet

Wat is een horizontale LAFkast?

de lucht in de kast wordt met een constante snelheid van 0,5m/s van achter in de kast door een HEPAfilter naar voren toe geblazen.
de kast beschermt het experiment maar niet de onderzoeker

Wat is een klasse I bio-safety LAFkast?

in de kast wordt de lucht uit de omgeving naar binnen gezogen via een kleine opening aan de voorkant. via een HEPA filter wordt de lucht die in de kast wwordt gezogen gefilterd en weer in de kamer of in een ventilatiesysteem geblazen.
de kast beschermt de onderzoeker maar niet het experiment

Wat is een klasse II bio-safety LAFkast?

hier wordt de lucht via een aparte HEPA filter van bovenaf aangezogen en zo als een laminaire luchtstrommn in de kast geblazen van boven naar beneden. onderaan aan de voorkant en de achterkant van het werkoppervlak wordt de lucht afgezogen waardoor er een luchtgordijn ontstaat om de ruimte af te sluiten van de buitenlucht. de afgezogen lucht wordt of door een HEPAfilter afgevoerd naar buiten of ze reciculeren 70% van de lucht.

Wat is een klasse III bio-safety LAFkast?

deze kast lijkt op kast II maar heeft handschoenen in de kast waardoor zeer besmettelijke materialen hier in gewerkt kunnen worden

Met welk middel wordt een LAFkast schoongehouden?

met decon, een decontaminerende zeepoplossing

Noem drie manieren om de pH te veranderen in het kweekmedium?

1. de CO2 spanning in de atmosfeer van de incubator
2. bicarbonaat concentratie in het medium
3.temperatuur (heeft invloed op de hoeveelheid CO2)

Wat is het effect van een hoog zuurstofgehalte in het kweekmedium?

leidt tot verhoogde aantallen vrije radicalen in het medium die celschade kunnen geven

Wat wordt er vaak toegevoegd aan medium om te zorgen dat het zuurstofgehalte niet zo een groot effect heeft?

radicaalscavengers zoals:
1. glutathion
2. beta-mercaptoethanol
3. dithioreitol

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

EDCC

Bekijk samenvatting

Een unieke studie- en oefentool
Nooit meer iets twee keer studeren
Haal de cijfers waar je op hoopt
100% zeker alles onthouden

Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.

Studiemateriaal generieke omslagafbeelding