Protein interactions - Fluorescentie/ licht gebaseerde assays
8 belangrijke vragen over Protein interactions - Fluorescentie/ licht gebaseerde assays
Wat is het principe van de eiwit-eiwit interactie techniek Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET)?
- Donor = lage golflengte, hoge energie (CFP)
- Acceptor = hoge golflengte, lage energie (YFP)
- Detectie is afstandsafhankelijk (< 10 nm), real time, in levende cellen en plasmiden met fusiegenen zijn getransfecteerd.
Wat zijn de beperkingen van FRET als eiwit-eiwit interactie techniek?
- Procedure: kloneerstap en transfectie benodigt; constructen met fusie-eiwitten
- Structuur: mogelijk sterische hindering, effect op eiwitstructuur
- Detectie: photobleaching van signaal, autofluorescentie van acceptor
Wat zijn de beperkingen van BRET als eiwit-eiwit interactie techniek?
- Kloneerstap en transfectie benodigt; constructen met fusie-eiwitten
- Mogelijke sterische hindering, effect op eiwitstructuur
- Hogere cijfers + sneller leren
- Niets twee keer studeren
- 100% zeker alles onthouden
Voor mijn 1e tentamen haalde ik een 6. Toen ben ik gaan zoeken naar manieren om beter te leren en ben ik Study Smart tegen gekomen. Sindsdien heb ik een 9,0 - 8,0 - 7,6 - 8,0 - 8,0 gehaald. Ik raad het echt íédereen aan die het maar horen wil. Ik ben er zo blij mee!!
Met mijn oude methode was ik geslaagd voor maar 3 van de 8 vakken. Sinds ik mijn aantekeningen digitaal maak in study smart, ben ik voor alle vakken de éérste keer geslaagd. StudySmart neemt voor mij de stress van slagen of niet slagen weg.
Door StudySmart gaat het op zo veel vlakken beter met mij. Eerst had ik continu studiestress en ik had nergens tijd voor. Nu voel ik mij rustig en zelfverzekerd (door gebruik van het programma). Eerst haalde ik meestal een 7, nu vaak een 8 of zelfs een 9.
Hey Chris, ik wil je echt hartelijk danken voor het ontwikkelen van het platform. Ik haalde hiervoor altijd rond de 6/10 voor m'n tentamens, nu een 8,6, een 7,9 en een 7,6!!
Sinds ik Study Smart gebruik, is mijn gemiddelde 1 punt gestegen. Ik heb zelfs een statistisch vak met een 10/10 afgerond terwijl ik slecht ben in statistiek. Nu volg ik extra vakken omdat vorig jaar zo goed ging door Study Smart. Veel dank!
Sinds ik ben gaan leren met StudySmart ben ik geslaagd voor al mijn examens!!! Geen herexamens!! Eerst was ik al blij met een voldoende en nu haal ik alleen maar goede cijfers. Veel dank!
Ik heb alle vakken die ik met Study Smart heb geleerd gehaald. Met rechten ben ik van een 5 naar een 8 gegaan! Ik weet nu zeker dat ik al mijn vakken gewoon ga halen.
Ik dacht altijd dat ik goed studeerde. Mijn cijfers waren ook prima. Ik had mij nooit kunnen voorstellen dat ik zo veel beter en sneller zou studeren door het toepassen van deze vaardigheden.
Ik voel mij voor het eerst 100% zeker over de manier waarop ik leer. Ik heb nu het complete overzicht en de structuur die ik nodig had
Door Study Smart kreeg ik weer plezier in het studeren en haalde ik direct betere cijfers. Alles ging ineens beter. Ik raad Study Smart enorm aan aan scholieren en studenten.
Met dit plaform kan ik super snel en gestructueerd studeren. Ik ben nooit meer de weg kwijt in de stof of in mijn aantekeningen en maak veel sneller goede samenvattingen.
Eerst waren mijn aantekeningen een zooitje. Nu gebruik ik Study Smart en studeer ik super gestructureerd. Het helpt mij om tijd te besparen waardoor ik ook andere dingen kan doen die ik belangrijk vind.
Leerlingen die met het systeem hebben gewerkt hebben gewoon een beter resultaat behaald. Het systeem past alle leertrucjes zo toe, dat zowel de kinderen die goed scoren, maar ook zij die minder scoren, aan hun trekken komen.
Hey Chris, ik wil je enorm bedanken. Het vak waar ik vorig jaar nog net een 5,5 voor haalde, heb ik nu voor ditzelfde vak maar liefst een 9,7 gehaald! Mede dankzij jouw methode! Heel erg bedankt!
Het grootste effect is dat mijn kind veel enthousiaster is over school! Elke ouder wilt graag dat zijn kind het goed doet op school, en Study Smart draagt daar aan bij.
Dankzij StudySmart heb ik vorig jaar al mn examens gehaald en ook veel betere punten gehaald. Maar bovenal heb ik nu gewoon een heel goede studiemethode onder de knie, waarmee ik zeker weet dat ik de rest van mijn studie gewoon ga halen.
Wat is het principe van Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC)?
- N- en C-terminale fragmenten van bijv GFP, YFP, mCherry.
- Eiwitten van interesse A en B worden gekloneerd als fusie aan zo 'n fragment.
- Detectie: interactie A/B -> triggert vouwing van fluorescente fragmenten in natieve vorm.
- Real time, in levende cellen, geen substraten nodig.
- Krachtige methode omdat het interacties kan bevriezen, dus als er ooit een interactie is geweest dan kan je dat zien.
Wat zijn de beperkingen van Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC)?
- Procedure: kloneerstap en transfectie nodig; constructen met fusie-eiwit
- Structuur: mogelijk sterische hindering, effect op eiwitstructuur
- Detectie: onomkeerbaar (blijft altijd aanstaan als hij eenmaal gevouwen is)
Wat is het principe van Biolayer Interferometry (BLI)?
- Wit licht wordt gereflecteerd op twee oppervlakken aan de tip van een bio-sensor. (1) internal reference (constante) (2) monster (variabele)
- Molecuulbinding aan oppervlak
- Toename dikte van bindingsoppervlak
- Golflengte verschuift (Delta Lambda) (alleen gebonden moleculen)
- Verschuiving is afhankelijk van de dikte van de laag tussen de oppervlakken (geeft interactie weer)
Hoe kan een Biolayer Interfermotry (BLI) spectrum worden afgelezen?
- Hoe steiler de associatie curve, hoe hoger de affiniteit is, hoe hoger de Kon rate is (hoe makkelijker het analiet bindt).
- Hoe steiler de dissocatie curve naar beneden gaat, hoe hoger de Koff rate is (hoe makkelijker het analiet loslaat).
- Affiniteit KD = Kd/Ka = Koff/Kon
Wat is een voorbeeld van een Biolayer Interferometrie (BLI) experiment?
- Doel: karakteriseren en sorteren van best bindende antilichamen voor een epitoop op een antigeen (of binders die op andere plekken binden dan het antilichaam die je al hebt)
- Gebruikt voor bijv vaccin ontwikkeling
- Binding van gebiotinyleerd epitoop aan streptavidine biosensor
- laden van de biosensor met test-antilichamen
- incubatie met competerende antilichaam-varianten
- associatie
- dissociatie
De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:
- Een unieke studie- en oefentool
- Nooit meer iets twee keer studeren
- Haal de cijfers waar je op hoopt
- 100% zeker alles onthouden
