Protein interactions - (Immuno-)precipitatie assays
9 belangrijke vragen over Protein interactions - (Immuno-)precipitatie assays
Wat betekent "geïmmobiliseerd" in eiwitzuiverings- of interactie-processen?
Het doel van het immobiliseren van eiwitten is om ze stabiel, toegankelijk en functioneel te houden terwijl ze worden onderworpen aan verschillende zuiverings- of analysetechnieken.
Verschillende technieken zijn covalente binding, affiniteitsbinding, adsorptie en encapsulatie.
Wat is het stapsgewijs proces van co-immunoprecipitatie (co-IP)?
- Antilichaam bindt antigeen, incubeer
- Was ongebonden eiwitten weg
- Elueer specifieke antigenen (als complex met eiwit met nieuw gebonden factoren)
- Identificatie: MS, Western, SDS-PAGE
Wat zijn de verschillende bindingsmethoden voor antilichamen aan de kolom/kralen?
- Covalent gebonden (chemisch)
- Hoge affiniteitsinteractie (eiwit A of G)
- Eiwit G-kralen:
- E. Coli eiwit G
- 17 kDa
twee bindingsplaatsen voor IgG
- Hoge bindingsaffiniteit voor muis - Eiwit A-kralen:
- Bacillus eiwit A
- 45 kDa
- vier bindingsplaatsen voor IgG
- hoge bindingsaffiniteit voor mens
- Hogere cijfers + sneller leren
- Niets twee keer studeren
- 100% zeker alles onthouden
Voor mijn 1e tentamen haalde ik een 6. Toen ben ik gaan zoeken naar manieren om beter te leren en ben ik Study Smart tegen gekomen. Sindsdien heb ik een 9,0 - 8,0 - 7,6 - 8,0 - 8,0 gehaald. Ik raad het echt íédereen aan die het maar horen wil. Ik ben er zo blij mee!!
Met mijn oude methode was ik geslaagd voor maar 3 van de 8 vakken. Sinds ik mijn aantekeningen digitaal maak in study smart, ben ik voor alle vakken de éérste keer geslaagd. StudySmart neemt voor mij de stress van slagen of niet slagen weg.
Door StudySmart gaat het op zo veel vlakken beter met mij. Eerst had ik continu studiestress en ik had nergens tijd voor. Nu voel ik mij rustig en zelfverzekerd (door gebruik van het programma). Eerst haalde ik meestal een 7, nu vaak een 8 of zelfs een 9.
Hey Chris, ik wil je echt hartelijk danken voor het ontwikkelen van het platform. Ik haalde hiervoor altijd rond de 6/10 voor m'n tentamens, nu een 8,6, een 7,9 en een 7,6!!
Sinds ik Study Smart gebruik, is mijn gemiddelde 1 punt gestegen. Ik heb zelfs een statistisch vak met een 10/10 afgerond terwijl ik slecht ben in statistiek. Nu volg ik extra vakken omdat vorig jaar zo goed ging door Study Smart. Veel dank!
Sinds ik ben gaan leren met StudySmart ben ik geslaagd voor al mijn examens!!! Geen herexamens!! Eerst was ik al blij met een voldoende en nu haal ik alleen maar goede cijfers. Veel dank!
Ik heb alle vakken die ik met Study Smart heb geleerd gehaald. Met rechten ben ik van een 5 naar een 8 gegaan! Ik weet nu zeker dat ik al mijn vakken gewoon ga halen.
Ik dacht altijd dat ik goed studeerde. Mijn cijfers waren ook prima. Ik had mij nooit kunnen voorstellen dat ik zo veel beter en sneller zou studeren door het toepassen van deze vaardigheden.
Ik voel mij voor het eerst 100% zeker over de manier waarop ik leer. Ik heb nu het complete overzicht en de structuur die ik nodig had
Door Study Smart kreeg ik weer plezier in het studeren en haalde ik direct betere cijfers. Alles ging ineens beter. Ik raad Study Smart enorm aan aan scholieren en studenten.
Met dit plaform kan ik super snel en gestructueerd studeren. Ik ben nooit meer de weg kwijt in de stof of in mijn aantekeningen en maak veel sneller goede samenvattingen.
Eerst waren mijn aantekeningen een zooitje. Nu gebruik ik Study Smart en studeer ik super gestructureerd. Het helpt mij om tijd te besparen waardoor ik ook andere dingen kan doen die ik belangrijk vind.
Leerlingen die met het systeem hebben gewerkt hebben gewoon een beter resultaat behaald. Het systeem past alle leertrucjes zo toe, dat zowel de kinderen die goed scoren, maar ook zij die minder scoren, aan hun trekken komen.
Hey Chris, ik wil je enorm bedanken. Het vak waar ik vorig jaar nog net een 5,5 voor haalde, heb ik nu voor ditzelfde vak maar liefst een 9,7 gehaald! Mede dankzij jouw methode! Heel erg bedankt!
Het grootste effect is dat mijn kind veel enthousiaster is over school! Elke ouder wilt graag dat zijn kind het goed doet op school, en Study Smart draagt daar aan bij.
Dankzij StudySmart heb ik vorig jaar al mn examens gehaald en ook veel betere punten gehaald. Maar bovenal heb ik nu gewoon een heel goede studiemethode onder de knie, waarmee ik zeker weet dat ik de rest van mijn studie gewoon ga halen.
Wat zijn de voor- en nadelen van de bindingsmethode met eiwit G of A voor binding van antilichamen aan de kolom?
- bolletjes prot A of G kan je kopen en je kan hier je eigen kralen van maken, simpeler -> veel gebruikt
- Niet covalent gebonden waardoor soms bij elutie ook antilichamen meekomen (bleeding of column)
- zware keten 50 kDa bandje op gel
- lichte keten 25 kDa bandje op gel
-> dit kan storend zijn als je eiwit van interesse in dit gebied ligt
-> oplossing: covalent gebonden methode gebruiken (pre-immobilized approach)
Wat is RNA-immunoprecipitatie (RIP)?
Wat is chromatine immunoprecipitatie (ChIP)?
- bindt eiwit aan DNA met bijv formaldehyde
- Cellyse: antilichaam bindt aan lysaat dat wordt afgeschoven
- Antilichaam bijv tegen TF waarvan je weet dat die op het DNA zit, maar je weet niet waar, dan kan je kijken welke andere eiwitten mee geïsoleerd worden en welk stukje DNA
- DNA en eiwit-analyse:
- DNA fragment met PCR-analyse of sequencing
- Eiwit (complex) met mass spectrometry
Wat zijn de voor- en nadelen van een in vitro pull-down assay?
- Makkelijke expressie en zuivering
- Beperkt aantal eiwitten: zuiver systeem
- Beperkt aantal eiwitten: geen complexen
- Juiste vouwing van over-expressed eiwitten?
Wat zijn de voor- en nadelen van de verschillende (immuno)precipitatie methoden?
- Eiwitten in natieve conformatie
- Complexen met eiwit/eiwit, eiwit/RNA, eiwit/DNA
- Open benadering; geen assumpties
- Epitoop kan niet bereikbaar zijn doordat de tag in de weg zit
- Benodigt een follow-up: detectie van gebonden factoren
- Alleen stabiele interacties kunnen worden gedetecteerd; dynamische dissociatie
Wat is het verschil van BioID met standaard co-IP/ pull down methoden?
- BioID staat identificatie van eiwitten toe die tijdelijk binden
- Dankzij sterke biotine-avidine bindingsaffiniteit kunnen harde wasbeurten worden gebruikt die achtergrond eiwitbinding kunnen verminderen
De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:
- Een unieke studie- en oefentool
- Nooit meer iets twee keer studeren
- Haal de cijfers waar je op hoopt
- 100% zeker alles onthouden
