Introductie TLC HPLC
50 belangrijke vragen over Introductie TLC HPLC
Wat gaat goed samen? (polair apolair)
Apolair mengt onderling goed.
Polair en apolair mengen niet goed samen.
Welke van de twee lost goed op in water? (polair apolair)
Andere polaire moleculen zullen dus goed met water mengen, oftewel: ze lossen op in water. Apolaire moleculen lossen niet (of althans zeer slecht) op in water.
Welke groepen bevatten polaire moleculen?
- Hogere cijfers + sneller leren
- Niets twee keer studeren
- 100% zeker alles onthouden
Waarom moet het eluens ontgast worden?
Op welke manieren kan er ontgast worden?
Welke manier van ontgassen heeft jouw voorkeur?
Wat moet je eerst doen voordat je de HPLC gaat gebruiken en waarom?
Hoeveel vloeistof (eluens) moet je dan aanmaken voor de HPLC?
Waar moet je opletten bij het gebruik van bufferoplossingen in HPLC opstellingen?
Silica lost op boven pH 7 en onder pH 3, dus letten op de pH.
Buffer moet aansluiten bij de te scheiden stoffen.
Welke stoffen gebruik je om een buffer te maken?
Let op de UV absorptie.
Let op de vluchtigheid (MS).
Wat moet de concentratie van een buffer zijn?
Met welke formule maak je de buffer?
Wat is een organische modifier?
Waarom zijn er meedere pompen (zuigers) in een HPLC opstelling?
Betere doorstroming.
Er is een hoge druk nodig om de mobiele fase door de kolom heen te leiden.
Wat is het dood volume?
Hoe kan het dood volume gecontroleerd worden?
Begin en eindtijd aceton piek bepalen.
Bepaal volume aan de hand van de ingestelde flow.
Dit volume mag niet groter zijn dan 5% van het beginvolume.
Bepaal tevens de asymetriefactor op 10% hoogte. (ideaal is 1).
Wat is en waarvoor dient een prefilter?
Waarom worden monsters vooraf gefiltreerd?
Wat gebeurt er als je in de injectstand de loop vult?
Hoe kan je de levensduur van de kolom (C18) verlengen?
Monsters filtreren.
Gebruik van voorkolom.
pH eluens tussen 2,5 en 9 houden (beter tussen 3-7).
Eluens filtreren.
Kolom spoelen met sterk eluens.
Niet stoten of laten vallen.
Wat zijn de eigenschappen van een goede detector?
Gevoelig.
Laag ruisniveau.
Instelbare selectiviteit.
Groot lineair gebied.
Stabiel.
Eenvoudig te bedienen.
Minimale piekverbreding.
Hoge responsietijd.
Waarom wordt kwarts vaak gebruikt om de vloeistoffen in te doen in een UV detector?
Wat is een DAD detector? En voor welke analyses inzetbaar?
Zeer breed inzetbaar.
Wat is een Fluorescentie detector? En voor welke analyses inzetbaar?
Wat is een Evaporative light scattering detector? Welke analyses?
Wat is een MS detector? Voor welke analyses geschikt?
Wat is een PDA detector? En waarom zijn deze beter dan gewone UV detectoren?
Waarom wordt er bij HPLC soms gebruik gemaakt van derivatiseren?
Wanneer een groep niet wordt gedetecteerd wordt deze gecombineerd met een groep welke wel wordt gedetecteerd (UV actief maken). Dus selectiever.
Gebruik van andere detector mogelijk.
Elimineren van interfererende componenten.
Wat is het voordeel van acetonitril als eluens t.o.v. methanol?
De back pressure van acetonitril is lager dan die van methanol.
De hydroxylgroep van methanol kan deelnemen aan waterstofbruggen en dat wil je niet.
De adsorptie van acetonitril is lager dan die van methanol.
Wat wordt bedoeld met doorslagvolume bij SPE?
Hoe zou jij het doorslagvolume in de praktijk bepalen?
Voor welk type monsters gebruik je een HPLC?
Welke groepen koolwaterstoffen zijn er?
Wat zijn de groepen met zuurstof?
Welke groep kan licht absorberen?
Welke stoffen worden gebruikt in de NP?
Wat is het principe van NP?
Competitie tussen analyt en oplosmiddel (willen beiden willen).
Waaruit bestaat de stationaire fase van NP?
Aluminiumoxide (Al2O3)
Waaruit bestaat de mobiele fase bij NP?
Modifier is polair oplosmiddel (water, alcohol)
Modifier moet wel mengen!
Welke moleculen/groepen kunnen er waterstofbruggen vormen?
Stikstof met stikstof (N=N wordt ookwel diasa genoemd).
Ether kan waterstofbruggen vormen met dakjes op de O (zie schrift).
Amines.
Welke moleculaire krachten zorgen voor de adsorptie?
Kun je ruimtelijke isomeren van elkaar scheiden m.b.v. adsorptiechromatografie?
Wordt het overgrote deel van de HPLC analyses met NP of RP uitgevoerd?
Waarvoor wordt de RP gebruikt? (verbindingen)
Hoe is de mobiele fase bij RP?
Hoe werkt het retentiemechanisme van RP?
De organische modifier zorgt voor een 'film' rond de C18.
Welke organische modifier geeft een dikke laag en welke en dunne?
Wanneer wordt elutie met ionsupressie gebruikt?
- Negatief geladen (carboxylaat)
- Positief geladen (ammonium)
Waarop is elutie met ionsuppressie gebaseerd?
Welke pH moet je selecteren voor ion supressie?
De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:
- Een unieke studie- en oefentool
- Nooit meer iets twee keer studeren
- Haal de cijfers waar je op hoopt
- 100% zeker alles onthouden