Introductie TLC HPLC

50 belangrijke vragen over Introductie TLC HPLC

Wat gaat goed samen? (polair apolair)

Polair mengt onderling goed.
Apolair mengt onderling goed.
Polair en apolair mengen niet goed samen.

Welke van de twee lost goed op in water? (polair apolair)

Het watermolecuul (H2O) is polair, dat hebben wetenschappers vastgesteld.
Andere polaire moleculen zullen dus goed met water mengen, oftewel: ze lossen op in water. Apolaire moleculen lossen niet (of althans zeer slecht) op in water.

Welke groepen bevatten polaire moleculen?

OH-groepen en NH-groepen. Deze groepen kunnen waterstofbruggen vormen (dus goed oplossen in water).
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Waarom moet het eluens ontgast worden?

Zodat er geen luchtbellen in de KOLOM komen. Luchtbellen kunnen namelijk ruis veroorzaken in de DETECTOR en kunnen tevens de basislijn verstoren bij lage golflengten.

Op welke manieren kan er ontgast worden?

He doorleiden, filtreren/vacuum, trilbad, verwarmen/refluxen.

Welke manier van ontgassen heeft jouw voorkeur?

He doorleiden. Volgens mij heb je hierbij de meeste kans dat het echt goed ontgast worden. Echter is He erg duur. Mijn tweede keuze zal dan ook filtreren zijn.

Wat moet je eerst doen voordat je de HPLC gaat gebruiken en waarom?

Purgen (spoelen). Dit om het systeem te spoelen (zout vorming voorkomen, bescherming seals).

Hoeveel vloeistof (eluens) moet je dan aanmaken voor de HPLC?

Rekening houden met spoelen, dus ongeveer 600 ml.

Waar moet je opletten bij het gebruik van bufferoplossingen in HPLC opstellingen?

Zorgen dat de kolom heel blijft.
Silica lost op boven pH 7 en onder pH 3, dus letten op de pH.
Buffer moet aansluiten bij de te scheiden stoffen.

Welke stoffen gebruik je om een buffer te maken?

pKa ca. 1 pH eenheid vanaf gewenste pH.
Let op de UV absorptie.
Let op de vluchtigheid (MS).

Wat moet de concentratie van een buffer zijn?

Tussen de 10 en 25 mmol/L.

Met welke formule maak je de buffer?

Met deze formule.

Wat is een organische modifier?

Buffer en eluens.

Waarom zijn er meedere pompen (zuigers) in een HPLC opstelling?

Zo blijft het constant.
Betere doorstroming.
Er is een hoge druk nodig om de mobiele fase door de kolom heen te leiden.

Wat is het dood volume?

Het volume vanaf injectie tot detectie dat zich buiten de kolom bevindt.

Hoe kan het dood volume gecontroleerd worden?

Aceton injecteren zonder kolom.
Begin en eindtijd aceton piek bepalen.
Bepaal volume aan de hand van de ingestelde flow.
Dit volume mag niet groter zijn dan 5% van het beginvolume.
Bepaal tevens de asymetriefactor op 10% hoogte. (ideaal is 1).

Wat is en waarvoor dient een prefilter?

Deze zet je op je spuit. Het is een filter die de stof vooraf filtreert.

Waarom worden monsters vooraf gefiltreerd?

Zodat er geen deeltjes in zitten welke de kolom dicht kunnen laten slippen.

Wat gebeurt er als je in de injectstand de loop vult?

Dan gaat het naar de waste.

Hoe kan je de levensduur van de kolom (C18) verlengen?

Druk langzaam opvoeren.
Monsters filtreren.
Gebruik van voorkolom.
pH eluens tussen 2,5 en 9 houden (beter tussen 3-7).
Eluens filtreren.
Kolom spoelen met sterk eluens.
Niet stoten of laten vallen.

Wat zijn de eigenschappen van een goede detector?

Universeel of specifiek.
Gevoelig.
Laag ruisniveau.
Instelbare selectiviteit.
Groot lineair gebied.
Stabiel.
Eenvoudig te bedienen.
Minimale piekverbreding.
Hoge responsietijd.

Waarom wordt kwarts vaak gebruikt om de vloeistoffen in te doen in een UV detector?

Hier zitten geen UV absorberende deeltjes in, dus de meting is het meest betrouwbaar.

Wat is een DAD detector? En voor welke analyses inzetbaar?

Diode Array Detector.
Zeer breed inzetbaar.

Wat is een Fluorescentie detector? En voor welke analyses inzetbaar?

Voor fluorescerende stoffen (aminozuren, eiwitten).

Wat is een Evaporative light scattering detector? Welke analyses?

Zeer breed inzetbaar (alleen geen dubbele bindingen).

Wat is een MS detector? Voor welke analyses geschikt?

Massa Spectrofotometer. Geschikt voor isotopen, moleculen en molecuulcomplexen (geen zouten).

Wat is een PDA detector? En waarom zijn deze beter dan gewone UV detectoren?

Een fotodiode array detector. Zijn flexibeler dan UV detectoren en er zijn minder mechanische problemen (geen bewegende delen).

Waarom wordt er bij HPLC soms gebruik gemaakt van derivatiseren?

Om de vluchtigheid te verhogen.
Wanneer een groep niet wordt gedetecteerd wordt deze gecombineerd met een groep welke wel wordt gedetecteerd (UV actief maken). Dus selectiever.
Gebruik van andere detector mogelijk.
Elimineren van interfererende componenten.

Wat is het voordeel van acetonitril als eluens t.o.v. methanol?

De elutie sterkte is sterker van acetonitril dan die van methanol.
De back pressure van acetonitril is lager dan die van methanol.
De hydroxylgroep van methanol kan deelnemen aan waterstofbruggen en dat wil je niet.
De adsorptie van acetonitril is lager dan die van methanol.

Wat wordt bedoeld met doorslagvolume bij SPE?

Het volume wat op de kolom kan voor de doorslag (belading van SPE).

Hoe zou jij het doorslagvolume in de praktijk bepalen?

Wanneer er al resultaat is voordat het monster helemaal geïnjecteerd is.

Voor welk type monsters gebruik je een HPLC?

Stoffen in vloeibare vorm, want de HPLC gebruikt een vloeistof als drager.

Welke groepen koolwaterstoffen zijn er?

Alkylgroep, Alkeen, Alkyn en fenylgroep.

Wat zijn de groepen met zuurstof?

Alcohol, Ether, Aldehyde, Keton, Diketon, Carbonzuur, Ester, Anhydride.

Welke groep kan licht absorberen?

Carbonzuur, maar alkeen kan dit beter.

Welke stoffen worden gebruikt in de NP?

Polaire stoffen, welke oplosbaar zijn in het oplosmiddel (methanol of chloroform).

Wat is het principe van NP?

Adsorptie/desorptie (polair houdt van polair).
Competitie tussen analyt en oplosmiddel (willen beiden willen).

Waaruit bestaat de stationaire fase van NP?

Silicagel (Si(O)OH)
Aluminiumoxide (Al2O3)

Waaruit bestaat de mobiele fase bij NP?

Niet polaire oplosmiddelen (hexaan, heptaan, etc.)
Modifier is polair oplosmiddel (water, alcohol)
Modifier moet wel mengen!

Welke moleculen/groepen kunnen er waterstofbruggen vormen?

OH met OH.
Stikstof met stikstof (N=N wordt ookwel diasa genoemd).
Ether kan waterstofbruggen vormen met dakjes op de O (zie schrift).
Amines.

Welke moleculaire krachten zorgen voor de adsorptie?

H-bruggen, dipool-dipool, p-complex. (N=N)

Kun je ruimtelijke isomeren van elkaar scheiden m.b.v. adsorptiechromatografie?

Ja, adsorptie plaatsen op verschillende plaats 'in de ruimte'.

Wordt het overgrote deel van de HPLC analyses met NP of RP uitgevoerd?

95% met RP.

Waarvoor wordt de RP gebruikt? (verbindingen)

Scheiden van mengsels of low-molecular massa neutrale of geladen organische verbindingen.

Hoe is de mobiele fase bij RP?

Water (of buffer) + organische modifier (water/methanol of water/acetonitril).

Hoe werkt het retentiemechanisme van RP?

Er is een mobiele fase, een laagje organische modifier en een stationaire fase.
De organische modifier zorgt voor een 'film' rond de C18.

Welke organische modifier geeft een dikke laag en welke en dunne?

Methanol een dunne laag, acetonitril een dikkere laag (acetonitril is een sterker eluens dan methanol).

Wanneer wordt elutie met ionsupressie gebruikt?

Bij het scheiden van geladen stoffen:
- Negatief geladen (carboxylaat)
- Positief geladen (ammonium)

Waarop is elutie met ionsuppressie gebaseerd?

De aanpassing van pH zodanig dat de te scheiden stof(fen) ongeladen (neutraal) worden. De lading wordt dus onderdrukt.

Welke pH moet je selecteren voor ion supressie?

Bij een pH hoger als de pKa kan H afgestoten worden. Dus pH lager kiezen als pKa.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo