Startpagina / Samenvattingen / genoom deel 2 / gfp-cel-promotor

Introductie - DNA- manipulatie technieken

5 belangrijke vragen over Introductie - DNA- manipulatie technieken

Wat is een genomische DNA bank?

Alle fragmenten van het DNA die in plasmiden zijn gezet en die je kan kopen

Wat is een cDNA bank?

Fragmenten die in plasmiden worden gezet. Deze fragmenten zijn afkomstig uit mRNA wat is omgezet in dsDNA.

Hoe zorg je voor overexpressie met behulp van expressievectoren?

Expressievector bevat een hele sterke promoter sequentie.
cDNA wordt gekloneerd in een expressievector, direct na de serke promotor
expressievector wordt ingebracht in de cel die het eiwit moet gaan maken )bacterie of eukaryote cel)
productie van grote hoeveelheden van een bepaald eiwit in een levende cel

Wat is RNA-interferentie en wat doet het? En hoe krijg je het in de cel?

ShRNA= short hairpin RNA.
Als je wil dat het een risc complex vormt wil je dat het een stukje sense, een loop en een antisense stukje heeft.
je kan zelf zo'n stukje in de cel maken en kan dan een risc complex maken.

hoe krijg je het gewenste siRNA of shRNA in de cel?

synthetische siRNA's direcht 'inspuiten'(transfecteren)
cellen transfecteren met een plasmide dat codeert voor het shRNA
een gemodificeerd virus dat na infectie integreet in het genoom en codeert voor het shRNA
ook kan dit in een expressievector gezet worden.

Waarom GFP aan shRNA vector toevoegen?

GFP= green fluorescent protein
GFP zit niet in-frame achter de MCS, maar achter een eigen promotor. Dient als een reporter-gen in deze vector.
als de vector in de cel is en er shRNA gemaakt wordt, zal de cel groen oplichten omdat er ook GFP gemaakt wordt.

Losse GFP komt er tot expressie omdat die zijn eigen promotor hebben dus als je groene kleur hebt je dus het gen wat je wil hebben. Dus een soort controle want RNA zie je niet in de cel .

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

genoom deel 2

Bekijk samenvatting