De techniek: Western blotting
8 belangrijke vragen over De techniek: Western blotting
Protocol western blotting
- EW lysaat aanmaken van de cellen (op ijs)
- bepalen van EW concentratie
- sodium dodecyl sulfaat polyacrilamide gel maken
- ew laden op gel (van elk staal evenveel µg ew)
- elektroforese (ew scheiden)
- overblotten op membraan
- blot blokkeren (aspecifieke bindingen vermijden)
- incubatie met specifiek AL ( bepaald ew detecteren)
- negatieve en positieve controles en eiwitmerker
- detectie
Bereiden van eiwit lysaat
in dit labo gebeurd dit met een lysebuffer
- cellen open breken
Waarom bij eiwit extracties op ijs werken
- Hogere cijfers + sneller leren
- Niets twee keer studeren
- 100% zeker alles onthouden
Hoe wordt een PAA gel bekomen
- polymerisatie van acrylamidemonomeren tot een lange keten
- dit gaat kruiskoppelen met bisacrylamide
- initiatie van polymerisatie gebeurd door ammoniumpersulfaat (APS)
- katalysator tetramethylethyleendiamine (TEMED), katalyseerd de vorming van vrij radicalen van APS
- deze kunnen de polymerisatie starten
Van welke blotting w gebruik gemaakt in het labo
Hoe gebeurd het transfer van een ew vanuit het PAA gel
Veelgebruikte enzymen en substraten als merker
horseradisch peroxidase (HRP) en DAB of AEC: bruin gele kleur
horseradisch peroxidase (HRP) en luminol: blauw licht
Voordeel luminogeen substraat of fluorochroom
De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:
- Een unieke studie- en oefentool
- Nooit meer iets twee keer studeren
- Haal de cijfers waar je op hoopt
- 100% zeker alles onthouden