De techniek: Western blotting

8 belangrijke vragen over De techniek: Western blotting

Protocol western blotting

  1. EW lysaat aanmaken van de cellen (op ijs)
  2. bepalen van EW concentratie
  3. sodium dodecyl sulfaat polyacrilamide gel maken
  4. ew laden op gel (van elk staal evenveel µg ew)
  5. elektroforese (ew scheiden)
  6. overblotten op membraan
  7. blot blokkeren (aspecifieke bindingen vermijden)
  8. incubatie met specifiek AL ( bepaald ew detecteren)
  9. negatieve en positieve controles en eiwitmerker
  10. detectie

Bereiden van eiwit lysaat

Fysische bariere van de cel moet doorbroken worden
in dit labo gebeurd dit met een lysebuffer
  • cellen open breken  

Waarom bij eiwit extracties op ijs werken

Bij deze temperaturen zijn proteïnasen niet actief
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Hoe wordt een PAA gel bekomen

  1. polymerisatie van acrylamidemonomeren tot een lange keten
  2. dit gaat kruiskoppelen met bisacrylamide
  3. initiatie van polymerisatie gebeurd door ammoniumpersulfaat (APS)
  4. katalysator tetramethylethyleendiamine (TEMED), katalyseerd de vorming van vrij radicalen van APS
  5. deze kunnen de polymerisatie starten

Van welke blotting w gebruik gemaakt in het labo

Natte blotting

Hoe gebeurd het transfer van een ew vanuit het PAA gel

Op nitrocellulose of polyvinylideen difluoride (PVDF membraan

Veelgebruikte enzymen en substraten als merker

Alkalische fosfatase en NBT/Bcip: paarse neerslag en kleur
horseradisch peroxidase (HRP)  en DAB of AEC: bruin gele kleur
horseradisch peroxidase (HRP) en luminol: blauw licht

Voordeel luminogeen substraat of fluorochroom

Mogelijkheid om onmiddelijk te normaliseren

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo