Kolomchromatografie

13 belangrijke vragen over Kolomchromatografie

Welke varianten van HPLC technieken komen voor in klinische analytische chemie?

1. Normal phase HPLC.
Oppervlakte stationaire fase  Silica polair.
2. Reversed phase HPLC.
Oppervlakte stationaire fase silica meer apolair.

Wat is normal phase HPLC en hoe gaat het in z'n werking?

Hierbij is de stationaire fase opgebouwd uit silicia deeltjes die erg polair zijn door de SI-OH groepen aan het oppervlakte.

De mobiele fase die gebruikt wordt tijdens normal phase HPLC is zeer apolair bijv. Hexaan.

Retentie en scheiding onstaat door polaire interacties tussen stof en stationaire fase. Kortom als de stof zeer polair is zal het verbindingen aangaan met de stationaire fase waardoor de rentietijd groter is en als de stof zeer apolair is zal het met de mobiele fase een interactie aangaan waardoor het sneller door de kolom heen gaat.

Hoe is het mogelijk om de elutiesterkte in normal phase HPLC te veranderen.

Het is mogelijk om de retentietijden te verlagen door de mobiele fase meer polair te maken. Hoe dichter te mobiele fase lijkt op de stationaire fase hoe sneller moleculen er uit gaan.

Polariteit van mobiele fase verhogen door te mengen met meer polair oplosmiddel.

conclusie een meer polaire mobiele fase heeft een hogere elutiesterkte waardoor de retentietijd verlaagd kan worden.
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Hoe is het mogelijk om de stationaire fase in HPLC te veranderen.

Het is mogelijk om het oppervlakte van solica te modificeren. Bijvoorbeeld door een C18 groep toe te voegen waardoor het oppervlakte sterk apolair is. Dit wordt vaak ook gedaan bij reversed HPLC.

Hoe gaat reversed-phase HPLC in z'n werking?

De stationaire fase van silica is apolair. Bijvoorbeeld door Silica-C18 te gebruiken. Verder is de mobiele fase polair bijvoorbeeld water.

Retentie en scheiding zal nu bepaald worden door hydrofobe interactie tussen stof en stationaire fase.

polaire stof heeft weinig retentie (korte rentietijd)
Moleculen met hydrofobe delen hebben een langere rententietijd dan moleculen met minder hydrofobe delen.

Hoe is het mogelijk om de elutiesterkte in reversed-phase HPLC te veranderen.

Elutiesterkte is het vermogen om retentie te verminderen. Bij reversed phase HPLC is de stationaire fase apolair, om een lagere retentietijd te hebben zal de mobiele fase minder polaire gemaakt worden.

Polariteit van mobiele fase verlagen door te mengen met organische oplosmiddel.

Buiten de polariteit veranderen van de mobielefase wat kan er nog meer gedaan worden om de elutiesterkte aan te passen?

1) Inplaats van een isocratische reactie waarbij de compensitie gelijk wordt gehouden kan er ook aangezien bij HPLC pompen beschikbaar zijn verschillende hoeveelheden pompen op verschillende momenten. Dit wordt ook wel een gradiënt analyse genoemd. Hierbij wordt begonnen met een laag percentage en in overtijd wordt de samenstelling aangepast.

2) Spelen met de pH van het element. Een neutraalgeladen zuur of base zal per definitie veel apolairder zijn dan een gedeproporneerd zuur of base met een lading die veel polairder is. Hierdoor zal ook de retentietijd aangepast worden.

Hoe ziet een injector van een HPLC scheidingstechniek eruit?

Een injectie is hetzelfde als een schakelkraan waarbij er sprake is van verschillende posities. De loop die zich in de schakelkraan bevindt kan gevuld worden met het monster. Als vervolgens de kraan wordt opengedraaid kan het monster naar de kolom worden geleid.

Wat is de werking van de detectiecel waar gebruikt van wordt gemaakt tijdens HPLC scheiding?

De vloeistof wordt als eerst ingebracht via de injector en vervolgens op dezelfde manier opgevangen. Tijdens dat proces wordt er een UV-licht door het kolom heen geschenen en kan er op elk gegeven tijd het verschil van inkomend en uitkomend licht worden bepaald. Hieruit kan je op elk gegeven moment wat de absorptie en wat de transmissie is bepalen.

A = e x c x l

Waar hangt de piek die verkregen wordt door een UV-detector vanaf?

Piekhoogte en oppervlakte hangen af van:
- Ingestelde golflengte
-molaire absorptiecoëfficiënt van stof in mobiele fase bij een bepaalde golflengte
- Geïnjecteerde concentratie stof.

Waarom zijn aminozuren belangrijke markers?

Aminozuren vormen samen eiwitten. Eiwitten hebben een enzymatische werking waardoor als je één van de vele enzymen mist er veel stoffen in het mensenlijk lichaam niet gevormd kunnen worden.

Hoe wordt een aminozuur geanalyseerd als biomarker?

Tijdens een aminozuuranalyse wordt chromatografie toegepast ook wel ionchromatografie. In de silica deeltjes zorg je ervoor dat de silica deeltjes een positieve of negatieve lading hebben daar breng je als je een hoge pH hebt een negatief geladen aminozuur op die kunnen binden aan de stationaire fase. Vervolgens kunnen de componenten één voor één als eluaat door de kolom heen gaan.

Wat is het probleem bij het scheiden van aminozuren dankzij ionchromatografie?

De detectie van aminozuren gaat lastig aangezien ze geen geen geconjugeerd systeem bevatten waardoor absorptie nauwelijks plaats zal vinden.

Oplossing: Dervariseren van aminozuren waarbij een absorberende of fluorescerende groep wordt toegevoegd aan het aminozuur.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo