Lichtmicroscopie, wide-field fluorescentiemicroscopie en confocale fluorescentiemicroscopie
21 belangrijke vragen over Lichtmicroscopie, wide-field fluorescentiemicroscopie en confocale fluorescentiemicroscopie
Beschrijf de verschillende uitkomsten van het gebruiken van verschillende methodes van vergroting
s > 2f geeft een reële, verkleinde, omgekeerde afbeelding
2f > s > f geeft een reële, vergrote, omgekeerde afbeelding
s<f geeft een virtuele, vergrote, rechtopstaande afbeelding
Wat is het verband van het beeldafstand en brandpuntafstand met het beeld?
2f < s < f geeft een vergroot, reëel en omgekeerd beeld
s < f geeft een vergroot, irreëel en rechtop beeld
Beschrijf de opbouw van verschillende microscopen en het bijbehorende resultaat
Het object bevindt zich op een afstand korter dan de brandpuntafstand. De afbeelding is dus rechtop
Moderne samengestelde microscoop: bevat twee lenzen. Het deel van object naar objective is 2f<s<f. Het deel van image of objective naar de andere lens is s<f.
- Hogere cijfers + sneller leren
- Niets twee keer studeren
- 100% zeker alles onthouden
Wat is het bereik van het blote oog, licht microscoop en elektronen microscoop?
Lichtmicroscoop = 0,5 mm - 10 nm
Elektronenmicroscoop = 0,5 mm - 1/10 nm
Noem de verschillende oplossende vermogens van de manieren van waarnemen
Lichtmicroscoop: 10 nm tot 1 mm
Blote oog: 200 µm
Dit komt door de diffractielimiet. Bij normale lichtmicroscopie is deze maximaal 200 nm (=0,5x de golflengte van het gebruikte licht)
Welke methodes geven contrast bij lichtmicroscopie?
- Bright-field microscopie: alle kleuren worden direct door het sample geschenen. De kleur die doorlaat is de kleur die het bevat (eventueel met cell staining)
- Dark-field microscopie: licht wordt diagonaal op de cel geschenen. Soms wordt het licht omgebogen en opgevangen door de lens. Dit geeft een negatieve afbeelding
- Phase-contrast of DIC (differential-interference-contrast) microscopie: lichtgolven worden in fase de cel ingestuurd, maar komen met verschillende fases er weer uit. Dit geeft een contrast waarmee een afbeelding gemaakt kan worden
Wat is de maximale resolutie van een lichtmicroscoop en waar komt dat door?
Hoe kan weefsel gevisualiseerd worden?
- Fixatie (met glutaraldehyde)
- Inbedding in paraffine of kunsthars
- Sectioning (in plakjes snijden)
Vervolgens kan het weefsel gekleurd worden met organische kleurstoffen, die een affiniteit hebben voor een bepaald type moleculen. De exacte werking is vaak niet bekend, maar de volgende kleurstoffen worden geregeld gebruikt:
- Hematoxyline (negatief geladen moleculen, DNA, RNA, zure eiwitten)
- Kristalviolet/Safranine
Deze fluorochromen hebben dus hun eigen absorptie- en emissiespectrum. Zo kunnen gefixeerde cellen, levende cellen en gezuiverde componenten tot een afbeelding worden gemaakt.
Wat houden brightfield microscopie, dark-field microscopie en DIC microscopie in?
Wat bepaalt een optimale afbeelding middels fluorescentie?
Fototoxiciteit: productie van voor een cel schadelijke bijproducten (radicalen)
Beeldresolutie: vermogen om naastgelegen puntbronnen te onderscheiden
Tijdsresolutie: vermogen om dynamische processen beeld-voor-beeld vast te leggen
Signaal-ruis-verhouding: grootte van te meten signaal ten opzichte van achtergrondsignaal
Wat kan je kleuren met hematoxyline en kristalviolet/ safranine?
Wat kan een fluorescentie microscoop goed weergeven?
Waar moet je op letten bij fluorescentie?
Welke fluorescenties hebben een hoge affiniteit voor welke stoffen?
Wat is genetische fusie?
Wat kunnen we bepalen met fluorescentie?
Hoe verbeter je het beeld?
Wat kan je meten met een confocale microscoop?
Welke functie kan GFP hebben bij een confocale microscoop?
Welke golflengte is nodig voor dynamische eiwitlocalisatie?
Wat zijn FRAP en FLIP?
FLIP= Continue bleking waarbij je meet wat je niet bleekt
De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:
- Een unieke studie- en oefentool
- Nooit meer iets twee keer studeren
- Haal de cijfers waar je op hoopt
- 100% zeker alles onthouden