Lichtmicroscopie, wide-field fluorescentiemicroscopie en confocale fluorescentiemicroscopie

21 belangrijke vragen over Lichtmicroscopie, wide-field fluorescentiemicroscopie en confocale fluorescentiemicroscopie

Beschrijf de verschillende uitkomsten van het gebruiken van verschillende methodes van vergroting

Gebruik van een enkele convergerende lens leidt tot een omgekeerde afbeelding. F is het brandpunt, f de brandpuntafstand (karakteristiek van de lens) en s de locatie van het object.

s > 2f geeft een reële, verkleinde, omgekeerde afbeelding
2f > s > f geeft een reële, vergrote, omgekeerde afbeelding
s<f geeft een virtuele, vergrote, rechtopstaande afbeelding

Wat is het verband van het beeldafstand en brandpuntafstand met het beeld?

s > 2f geeft een verkleind, reëel en omgekeerd beeld
2f < s < f geeft een vergroot, reëel en omgekeerd beeld
s < f geeft een vergroot, irreëel en rechtop beeld

Beschrijf de opbouw van verschillende microscopen en het bijbehorende resultaat

Simpele microscoop: s<f
Het object bevindt zich op een afstand korter dan de brandpuntafstand. De afbeelding is dus rechtop

Moderne samengestelde microscoop: bevat twee lenzen. Het deel van object naar objective is 2f<s<f. Het deel van image of objective naar de andere lens is s<f.
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Wat is het bereik van het blote oog, licht microscoop en elektronen microscoop?

Blote oog = > 200  µm
Lichtmicroscoop = 0,5 mm - 10 nm
Elektronenmicroscoop = 0,5 mm - 1/10 nm

Noem de verschillende oplossende vermogens van de manieren van waarnemen

Elektronenmicroscoop: 0,1 nm  tot 1 mm
Lichtmicroscoop: 10 nm tot 1 mm
Blote oog: 200 µm
Dit komt door de diffractielimiet. Bij normale lichtmicroscopie is deze maximaal 200 nm (=0,5x de golflengte van het gebruikte licht)

Welke methodes geven contrast bij lichtmicroscopie?

  1. Bright-field microscopie: alle kleuren worden direct door het sample geschenen. De kleur die doorlaat is de kleur die het bevat (eventueel met cell staining)
  2. Dark-field microscopie: licht wordt diagonaal op de cel geschenen. Soms wordt het licht omgebogen en opgevangen door de lens. Dit geeft een negatieve afbeelding
  3. Phase-contrast of DIC (differential-interference-contrast) microscopie: lichtgolven worden in fase de cel ingestuurd, maar komen met verschillende fases er weer uit. Dit geeft een contrast waarmee een afbeelding gemaakt kan worden

Wat is de maximale resolutie van een lichtmicroscoop en waar komt dat door?

Het diffractielimiet zorgt ervoor dat de maximale resolutie 2x de golflengte is.

Hoe kan weefsel gevisualiseerd worden?

Vanwege de dikte van weefsel is het lastig om individuele cellen te bekijken. Dit kan echter wel, door de volgende stappen te volgen:
  1. Fixatie (met glutaraldehyde)
  2. Inbedding in paraffine of kunsthars
  3. Sectioning (in plakjes snijden)

Vervolgens kan het weefsel gekleurd worden met organische kleurstoffen, die een affiniteit hebben voor een bepaald type moleculen. De exacte werking is vaak niet bekend, maar de volgende kleurstoffen worden geregeld gebruikt:
  • Hematoxyline (negatief geladen moleculen, DNA, RNA, zure eiwitten)
  • Kristalviolet/Safranine

Deze fluorochromen hebben dus hun eigen absorptie- en emissiespectrum. Zo kunnen gefixeerde cellen, levende cellen en gezuiverde componenten tot een afbeelding worden gemaakt.

Wat houden brightfield microscopie, dark-field microscopie en DIC microscopie in?

Brightfield microscopie is kleuring aanbrengen om onderdelen makkelijker zichtbaar te maken. Dark-field microscopie is dat op sommige plekken licht dat vanuit verschillende kanten komt kan worden teruggekaatst en op andere plekken niet. DIC microscopie is het schijnen van licht door je object, waardoor er faseverschil door verschillende stoffen ontstaat en lichte en donkere onderdelen krijgt.

Wat bepaalt een optimale afbeelding middels fluorescentie?

Fotobleking: kapot gaan van fluorescente labels onder invloed van licht
Fototoxiciteit: productie van voor een cel schadelijke bijproducten (radicalen)


Beeldresolutie: vermogen om naastgelegen puntbronnen te onderscheiden
Tijdsresolutie: vermogen om dynamische processen beeld-voor-beeld vast te leggen
Signaal-ruis-verhouding: grootte van te meten signaal ten opzichte van achtergrondsignaal

Wat kan je kleuren met hematoxyline en kristalviolet/ safranine?

Hematoxyline kleurt negatief geladen moleculen (DNA, RNA, zure eiwitten). Kristalviolet kleurt positief geladen moleculen en safranine negatief geladen.

Wat kan een fluorescentie microscoop goed weergeven?

Gefixeerde cellen, levende cellen, gezuiverde componenten

Waar moet je op letten bij fluorescentie?

Licht maakt de cellen kapot, het is fototoxisch, de tijdresolutie, beeldresolutie, signaal-ruis-verhouding.

Welke fluorescenties hebben een hoge affiniteit voor welke stoffen?

DAPI voor DNA, anorganische (fotostabiel) en organische labels (fotoinstabiel) voor antibodies.

Wat is genetische fusie?

Natuurlijke fluorescentie gebruiken

Wat kunnen we bepalen met fluorescentie?

Locatie van eiwitten, structuur van cel-elementen en organellen, tijdsafhankelijke locatie en structuur

Hoe verbeter je het beeld?

Door deconvolutie= informatie gebruiken over z-positie en diffractie.

Wat kan je meten met een confocale microscoop?

Genactiviteit en de dynamische locatie van eiwitten of organellen

Welke functie kan GFP hebben bij een confocale microscoop?

Het kan fuseren met een eiwit en daardoor genexpressie en een time-laps laten zien.

Welke golflengte is nodig voor dynamische eiwitlocalisatie?

413 nm om 488 aan te slaan

Wat zijn FRAP en FLIP?

FRAP= bleken van je eiwit
FLIP= Continue bleking waarbij je meet wat je niet bleekt

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo