Samenvatting: Mbt
- Deze + 400k samenvattingen
- Een unieke studie- en oefentool
- Nooit meer iets twee keer studeren
- Haal de cijfers waar je op hoopt
- 100% zeker alles onthouden
Lees hier de samenvatting en de meest belangrijke oefenvragen van MBT
-
Basisprincipes van de PCR
Dit is een preview. Er zijn 222 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 20/10/2017
Laat hier meer flashcards zien -
Waarop baseer je een PCR?
DNA replicatie in een cel
- DNA polymerase beweegt over het DNA van 3 -> 5
- DNA polymerase maakt nieuw DNA van 5-> 3 -
Wat is het verschil tussen replicatie en PCR?
1. RNA primers/ artificiële DNA primers (oligo's)
2. 37C en 96C
3. helicase bij replicatie, taq polymerase (72C) bij PCR -
Wat is het protocol van PCR?
1. denaturatie ( = uitsmelten) 90-96C, 15-30 sec
2. annealing (= hybridisatie primer) 50-65C, 15-30 sec
3. extensie ( = elongatie door polymerase) 72C, 30s-5 min
(4. DNA synthese 72C, 10 min) -
Waar bevinden alle stoffen zich bij de fenol/chloroform isolatiemethode?
Eiwitten in de interfase, nucleinezuren en koolhydraten in de waterfase (bovenste fase), organische oplosmiddelen en vetten onderin de buis.
Na preciptatie met isopropanol is het DNA/RNA op de bodem neergeslagen. -
Waaraan moet een primer design aan voldoen?
- 3'end G of C
- 17-28 bp
- 40-60% GC
- dimeren en interne 'self-annealing' voorkomen
- Tm tussen 50-70C
-
Waarom manipuleer je DNA?
- eiwit in grote hoeveelheden produceren
- functie van genen of domeinen van genen te onderzoeken
- effect van gen mutanten bestuderen
- promotor activeren
- eiwit fluorescent maken en lokalisatie volgen -
waarom wordt cDNA gebruikt in PCR?
Omdat DNA-polymerases gebruikt worden en er dus geen RNA vermenigvuldigd kan worden. Daarom wordt er cDNA van RNA gemaakt. -
Hoe wordt cDNA gemaakt?
m.b.v. een reverse transcriptase en één primer. Er onstaat dan een RNA-DNA hybride die tijdens de eerste denaturatiestap vd PCR gedenatureerd zal worden. -
Wat zijn de regels bij het ontwerpen van primers?
- Tussen 17-28 bp
-Tussen 40 en 60% GC
- Een GC aan het 3'
- Een Tm tussen 55 en 70 C
-Beide primers moeten dezelfde Tm hebben (max 2 C verschil) -
Wat zijn de voordelen van qPCR?
-Minder kans op contaminatie doordat je geen analyse meer hoeft uit te voeren.
-Hoeveelheid product wordt gemeten, waardoor kwantificering van startmateriaal mogelijk is.
-Meerdere PCR producten tegelijk meten in één reactie.
- Hogere cijfers + sneller leren
- Niets twee keer studeren
- 100% zeker alles onthouden