Startpagina / Samenvattingen / Microbio / dna-cloning-host

Biotechnology

37 belangrijke vragen over Biotechnology

Wat is generic engineering?

Modification van genetic code (van levend organisme)

Wat zijn restriction enzymes?

Enzymen die specifieke sequentie herkennen en dsDNA knippen

Waar bestaat het substaart van een restrictie enzym uit?

4-8 basenparen

Wat is de functie van Agarose/ polycrylamide gel electrophoresis?

Scheiden van DNA fragmenten op basis van grootte / size

Hoe werkt Agarose/ polycrylamide gel electrophoresis?

Dna fragmenten komen op de negatieve kant van het elektrische veld
de fragmenten migreren naar de positieve kant
de snelheid van migratie hangt af van size/ molecular weight

Hoe kunnen recombinand DNA moleculen gemaakt worden?

De sticky ends van de fragmenten kunnen met elkaar binden (door DNA ligase) --> heet annealing

Wat is het probleem dat ontstaat als je eukaryeut DNA in bacterieel DNA wilt plaatsen?

Pre-mRNA van eukaryoten bevatten introns en exons en bacterien hebben niet de functie om de introns eruit te knippen

Wat is een oplossing voor het eukaryoot in bacterie DNA probleem?

Processed mRNA wordt uit eukaryoot gehaald
Dit kan gebruikt worden als template voor cDNA
dit wordt met behulp van reverse transcriptase gedaan

Wat zijn cloning vectors?

Een DNA molecuul dat zonder host chromosome kan repliceren

Wat zijn belangrijke overeenkomsten tussen cloning vectors?

Ze hebben een orgin
ze hebben multicloning sites
ze hebben een selectable marker

Wat zijn multicloning sites?

Een deel van het DNA met unieke restrictie sites

Waarom zijn plasmids goede cloning vectors?

Ze kunnen zelfstandig repliceren + ze zijn makkelijk te zuiveren

Op welke manieren kunnen plasmids worden opgenomen?

Conjucation
transformation
electroporation

Wat bepaalt de copy number voor plasmids?

De origin op het plasmide

Hoe kan je kijken of een host succesfully een plasmide heeft opgenomen?

Met behulp van een selectie marker (= gene on plasmid coding for protein needed for survival)

Wat moet er gebeuren als je een DNA fragment in een plasmide wilt plaatsen?

Beide moeten geknipt worden door hetzelfde restrictie enzym--> zo worden sticky ends gemaakt die op elkaar passen

Welke kleur heeft recombinant pU19?

Wit en wanneer het niet succesvol is gelukt--> blauw

Welke bacterie wordt heeft meest als host gebruikt voor cloning?

E. Coli

Welke eukaryoot wordt heeft meest als host gebruikt voor cloning?

S. Cervisea

Welke technieken worden gebruikt wanneer een microbe niet uit zichzelf kan transformeren naar recombinant?

Chemical transformation
electroporation

Hoe werkt chemical transformation?

Host cells worden blootgesteld aan 2+ cations
host cell word get heat-shocked in a solution met plasmids

Hoeveel primers worden gebruikt bij PCR

2 oligoucleotiden 1 voor elke template

Wat zijn oligonucleotide primers?

SsDNA molecule tussen 15-30 nucleotiden gemaakt door DNA synthesizer

Wat wordt er bedoeld met end-point PCR?

Het "officiele" einde van een PCR na hetvoltooien van meerder cycles

--> reation products are then collected and purrified

Wat is real time PCR?

=qPCR
PCR warabij er gekeken wordt naar de hoeveelheid template in een sample

Wat is het nadeel van conventional cloning?

Het DNA heeft natuurlijke restrictie sites nodig

Wat is seamless cloning?

Een manier van cloning (Gibsons assembly) waarbij geen restriction sites worden gebruikt--> hierdoor zijn er geen scars en seams in het product

Hoe wordt een genomic library gemaakt?

DNA wordt in fragmenten geknipt
Elk fragment wordt ingebouwd in een vector (dus elke vector heeft 1 deel van het chromosoom)
De vectors komen in contact met host cellen
elke host cell bevat een vector met een deel van t chromosoom
het DNA komt tot expressie
genen kunnen geisoleerd en geannalyseerd worden

Wat is genetic complementation?

Het vermogen van een gen om de orginele wild phenotype te herstellen--> wanneer het in een cell komt waar dit gen niet aanwezig is

Wat is een ander woord voor genetic complementation?

Phenotopic rescue

Wat is een heterologous gene?

Wanneer een gen van een organism egecloned is in een ander organisme

Wanneer is een heterologous gene een recombinant?

Wanneer de heterologous gen een promotor heeft dat herkent kan worden door de RNA polymerase van de host

Wat is een expression vector?

Een plasmid met een recombinant gen erin (door cloning)

Expressions vector hebben vaak regulatory regions van.... Omdat

Van een lac operon

omdat de expressie van de clones zo gecontroleerd kan worden--> mbv een inducer

Aan welke kant van een protein komt een his-tag?

Aan de N-terminus of de C-terminus

Waarom wordt histidine gebruikt voor tagging (His-tagging)?

Het kan goed binden aan metal ionen--> wanneer His bindt kunnen de eiwitten met His makkelijk geisoleerd worden

Hoe worden sequenties die coderen voor (G)FP worden toegevoegd aan een gen?

Transcriptional fusion: Replacing a sequance van een ander protein voor de GFP sequence

hierdoor is het afhankelijk van de promotor van het oude protein

Translational fusion: GFP sequence wordt toegevoegd aan het einde van het gen waarin je geinterreseerd bent

protein + fluorescence komen uit translatie

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

Microbio

Bekijk samenvatting

Een unieke studie- en oefentool
Nooit meer iets twee keer studeren
Haal de cijfers waar je op hoopt
100% zeker alles onthouden

Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.

Studiemateriaal generieke omslagafbeelding