Startpagina / Samenvattingen / Class notes - Microbiologie praktijk / cellen-dna-moleculen

Electroporeren

5 belangrijke vragen over Electroporeren

Wat zijn de 4 manieren om een plasmide in een cel te brengen (transformeren)?

Door electroporatie
Via de CaCl2 methode
Door transfectie (hierbij wordt er gebruik gemaakt van een virus)
Via de gun methode. (DNA in de bacterie schieten)

Wat gebeurt er als er te veel zout in de bacteriesuspensie zit?

Wanneer er te veel zout in de cuvet zit gaat de stroom niet door de cellen heen maar erlangs wat dan zorgt voor een grote knal en slecht getransformeerde cellen.

Wat zijn de 4 Kanttekeningen (complicaties) bij het berekenen van de transformatie efficiëntie?

Als je twee keer zoveel cellen gebruikt krijg je twee keer zoveel koloniën
Als er langere moleculen worden gebruikt gaan er minder moleculen in een microgram en het transformeren gaat minder gemakkelijker dan bij kortere moleculen.
supercoiled DNA transformeert gemakkelijker dan relaxed DNA. (geligeerd DNA is relaxed)
1ug leid in veel gevallen tot oververzadiging en dus tot een lagere transformatie efficiëntie dan bij kleinere hoeveelheden.

Waarom moet je de cuvet goed droogmaken?

Als je de cuvet niet goed droog maakt krijg je een enorme knal omdat elektriciteit en water niet goed samen gaan. Hierdoor worden als het ware alle cellen verbrand.

Waarom moet SOC medium zo snel mogelijk worden toegevoegd?

SOC medium zorgt ervoor dat de cellen weer kunnen herstellen/stabiliseren nadat je ze een shock toegediend hebt. Door de shock is de celwand kapot gegaan en deze moet weer hersteld worden. Zo kan de efficiëntie zo hoog mogelijk worden.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

Microbiologie praktijk

Bekijk samenvatting