Peterman Fluorescence microscopy

13 belangrijke vragen over Peterman Fluorescence microscopy

Wat is de eenheid van de tijdsschaal van fluorescentie

Ns ( 10^-9)

Herhaling: wat is stokes shift?

Dit is het verschil in golflengte tussen absorptie en emissie.

Waarom voeg je meestal een kleurstof toe?

Meeste stoffen zijn doorzichtig of fluoresceren niet. Let wel op want er zijn vaak niet goede fluorescente labels dus je wilt eigenlijk dat je sample fluorescent wordt.
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Wat zijn belangrijke eigenschappen van kleurstoffen die we zouden toevoegen?

Moet niet toxisch zijn, het moet goed aanhechten, kleur is van belang. Verder wil je geen triplet toestand deze kan namelijk langer duren. Er kan spraken zijn van dat het molecuul gebleekt wordt doordat zuurstof naar een singlet toestand gaat inplaats van je eigenl molecuul.

Het moet niet te groot zijn

je wilt dat de label specifiek is want je wilt het niet overal hebben, bijvoorbeeld door het te labelen aan een specifiek eiwit.

Wat is een inorganische kleurstof/ probe en leg uit wat het doet

Quatumdots is een voorbeeld van een anorganische proberen. Het is halfgeleider materiaal. Scherpe emissie en een breed absorptie spectrum.Voordeel hiervan is dat de verschillende lichten kan gebruiken en dat er verschillende emissies zijn. Vrij stabiel soms wel blinken gedraag maar is oké.


nadeel: de kern is niet zo groot maar om af te schermen moet er een laagje over dat is heel hydrofoob daarom moet je weer een laagje omheen, dus allemaal specifieken eiwitten waardoor het aan de grote kant is verder gaat het proces langzamer.

Wat zijn intrinsieke probes

Dit zijn probes die door jouw sample zelf gemaakt wordt. Hierbij zet je dus het sample aan om een fluorescerend eiwit aan te maken.

De intrinsieke probes: tryptofaan, nadph, chrolofyl, en flatins zijn deze goed of niet

Tryptofaan absorbeert uv licht en zend het ook weer uit maar werk niet goed omdat het niet goed zichtbaar is en fotonbleekting actief is.

nadph, goed maar ook slapjes.

chrlofoyl hebben mensen niet maar wel flavines. Sommige gevallen wanneer het is gebonden aan een eiwit is het fluorescent aan de blauwe kant dit wil je eigenlijk niet want je hebt te maken met achtergrond signalen.

Wat voor excitatie bronnen wordt er meestal gebruikt en waarom

Keuze tussen lamp, led of laser. Dit is vrij makkelijk, lamp is te breed en niet specifiek verder geen kleine spot. LED kan niet zo goed focussen daarom gebruik je een Aser omdat je een specifiek spectrum hebt en de spot goed gefocusseerd kan worden.

Welke type filters heb je en hoe werken ze?

Long pass--> hoge frequenties door laten
short pass--> lage frequenties door laten
band pass--> bepaalde golflengte doorlaten
dichroic long pass -> stuk reflectie en vervolgens door laten.

Wat is een nadeel als je filters van lasers maakt van glas zoals op de traditionele manier

Het is goedkoop en niet te scherp maar licht wordt geabsorbeerd dus heel warm. Soms zijn de glasplaten fluorescent waardoor er nieuw licht wordt gecreëerd.

? Wat voor type filters zijn de moderne filters

Interferentie filters, dit zijn hele dunne laagjes van materiaal met verschillende brekingsindexen waardoor je een trilholte creëert die bepaalde kleuren door laten en bepaalde kleuren reflecteeert. Zijn duur heel kwetsbaar maar werken super efficiënt en je kunt bijna honderdprocent transmissie krijgen.

Voor en nadelen confocal laser scanning

Voordeel penhole waardoor je out of focus licht blokkeert


nadeel: een voxel op 1 tijd, dus je scant echt per gebiedje het samplede af. Verder kan je last hebben van verstrooiing omdat er een limit is.

Wat zijn APD en PMT

Dit zijn point detectors, dit gebruik je bij confocale microscopie. APD meer gevoelig en je kan een kleiner gebied scannen. PMT is weer minder ruis.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo