Startpagina / Samenvattingen / Class notes - microscopie en spectroscopie / intensiteit-molecuul-hoek

Advanced fluorescentie microscopie

16 belangrijke vragen over Advanced fluorescentie microscopie

Wat is een groot limit als je kijkt naar confocal microscopie bij gebruik van levend weefsel?

Verstrooing. Door kleine deeltjes in lucht of water etc zijn er lokale plekken waar de brekingsindex anders is hierdoor zie je de verstrooide lichtstralen niet in het focus en wordt er minder fluorescentie gedetecteerd. Er is dus een limiet bij bepaalde diktes biologische samples.

Wat is multiproton microscopie?

Dit is als je twee of meer fotonen tegelijkertijd op een voorwerp laat komen hierdoor is wel genoeg energie nodig en intensiteit om de fotonen tegelijkertijd te laten schieten. Bij elkaar samen is de energie hoog genoeg om het molecuul naar een aangeslagen toestand te brengen en fluorescentie te krijgen. Wat je vaak ziet is bij de combinatie van de fotonen komt het molecuul in een hogere vibrationele toestand van de s1 vervalt via internaat conversion naar s1 en daarna emissie via fluorescentie.

Wat kan er gezegd worden over de verhouding van intensiteit van de fluorescentie en de excitatie normaal en tijdens een multiproton microscopie?

Normaal is de intensiteit evenredig. De kans dat er twee keer een foton komt is de intensiteit maal de intensiteit. Dus de fluorescentie intensiteit is recht evenredig met de excitatie intensiteit ^2.

Wat zijn de voordelen van een multi foton microscopie

Het is veel minder out of focus er is geen penhole nodig en als er een groot oppervlakte detector wordt gebruikt is er maar weinig signaal verlies vanwege scattering.

je kan uv absorbing des gebruiken

je kan rood licht gebruiken waarbij minder scattering is.

Hoe creer je de hoge intensiteit van een multi foton microscoop

Wat je doet met je objectief lens is de lichtstraal spartel compenseren, Je focusseert de stralen in het focusspot. Hoe dichter bij de focus hoe hoger de intensiteit. Bovenaan heb je honderd procent van de intensiteit daarna 50 daarna 10 normaal bij multifocus is het versterkt. Je krijgt dus een scherpere afhankelijkheid daarom veel minder out of focus. Hierdoor geen penhole nodig.

Wat zijn de twee nadelen van multifoton microscopie

Je hebt een bizar hoge intensiteit nodig en daardoor ook een pulsed laser. Grotere kans op breking.

Hh wat is het nadeel van whide field

Je krijgt grote parel bundels waardoor je veel out of focus fluorescentie krijgt. Oplossing confocaal in sommige zijn er ook andere oplossing een daarvan is tot internaat reflectie micrscopy

Wat is total interna reflection microscopy

Dit is dat er een grotere hoek dan de kritische hoek wordt gebruikt zodat de lichtstralen volledig gerefelcteerd worden en er een bepaalde diepte bereikt wordt

Wat wordt er gezegd over de NA waarde bij totale internaat reflectie

Je wilt dat je NA groter is dan 1.45 omdat dit een grotere conus heeft met een grotere hoek zodat je ervoor aan zorgen dat je alleen lichtstralen die onder die hoek binnenkomen en op het sample vallen en daardoor compleet gereflecteerd worden. Verder wil je een nauwe team hebben.

Hoe bereken je ook alweer de kritieke hoek

Sing ( hoek kritiek) = n2 / n1.

Waar hangt de diepte bij total internal micrscopy vanaf

De golflente, brekingsindexen en kritieke hoek. De diepte licht altijd tussen de 30 en 300nm

Wat is fysische limitatie

Dit is dat je niet oneindig scherpe focus hebt maar ongeveer de helft van je golflengte.

Wat zijn de twee methode om abbe limieten te omzeilen?

1. Stimulated emission depletion microscopy STED
2. Stochastisch photo activation of single fluoropheores (STORM/ PALM)

Naast STED wat is nog een andere manier om goede revolutie te krijgen? En wat is het verschil met STED

STORM ==> stoeierc photo activation of single fluorophores

Bij stad had je een hossen station Location hierbij heb je geen gekozen locatie maar een gekozen tijdsinterval. Je zorgt ervoor dat maar een klein gedeelte geoxideerd wordt. Dus 1 molecuul wordt geactiveerd en kan geëxciteerd worden.

Hoe wordt het gerealiseerd bij STORM dat er maar 1 molecuul wordt geoxideerd en kan worden afgebeeld bij tijdseenheid

Je molecuul gaat van een dark state naar een excitatable state warbij erdus maar een enkele molecuul is aangesproken op een bepaalde locatie dit zorgt voor hele grote precisie. Nadeel: hoge intensiteit waardoor soms toch buren worden geactiveerd.

Tot hoe diep in je sample kan je met TIRF meten?

Je hebt alleen heel dichtbij het oppervalk, als je moleculen geabsorbeerd of gebonden zijn aan het oppervlakte. Je ziet alleen de moleculen 50-100 nm van het oppervlakte. Ruimtelijke resolutie is 50-100nm veel kleiner nog dan de golflengte van het licht en de fraction limited spot size.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

microscopie en spectroscopie

Bekijk samenvatting

Een unieke studie- en oefentool
Nooit meer iets twee keer studeren
Haal de cijfers waar je op hoopt
100% zeker alles onthouden

Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.

Studiemateriaal generieke omslagafbeelding

Advanced fluorescentie microscopie

16 belangrijke vragen over Advanced fluorescentie microscopie

Wat is een groot limit als je kijkt naar confocal microscopie bij gebruik van levend weefsel?

Wat is multiproton microscopie?

Wat kan er gezegd worden over de verhouding van intensiteit van de fluorescentie en de excitatie normaal en tijdens een multiproton microscopie?

Wat zijn de voordelen van een multi foton microscopie

Hoe creer je de hoge intensiteit van een multi foton microscoop

Wat zijn de twee nadelen van multifoton microscopie

Hh wat is het nadeel van whide field

Wat is total interna reflection microscopy

Wat wordt er gezegd over de NA waarde bij totale internaat reflectie

Hoe bereken je ook alweer de kritieke hoek

Waar hangt de diepte bij total internal micrscopy vanaf

Wat is fysische limitatie

Wat zijn de twee methode om abbe limieten te omzeilen?

Naast STED wat is nog een andere manier om goede revolutie te krijgen? En wat is het verschil met STED

Hoe wordt het gerealiseerd bij STORM dat er maar 1 molecuul wordt geoxideerd en kan worden afgebeeld bij tijdseenheid

Tot hoe diep in je sample kan je met TIRF meten?

Samenvattingen die gerelateerd zijn aan Peterman optical microscopy

Class notes - microscopie en spectroscopie

Hoofdstukken vermogensrecht

Inleiding strafrecht

Essential Cell Biology, Fourth Edition

Hoofdstukken uit de Europese codificatiegesc…

Staatsrecht

Hoofdstukken vermogensrecht

Grondtrekken van het Nederlandse strafrecht

Natuurwetenschappen en medische basisvakken

inleiding strafrecht

Oefentoetsen vragen

Class notes - Medische pathofysiologie 2