Denaturatie en renaturatie - Renaturatie

7 belangrijke vragen over Denaturatie en renaturatie - Renaturatie

Wanneer zal er renaturatie optreden?

Indien de omstandigheden renaturatie toelaten, dan zal het enkelstrengig DNA-fragment renatureren indien het zijn originele partner of eenzelfde complementair fragment tegenkomt.

Hoe wordt het verloop van renaturatie uitgedrukt?

Het verloop van de renaturatie wordt uitgedrukt in een Cot-curve, waarbij de fractie DNA-moleculen die renatureren uitgezet wordt ten opzichte van de logaritme van de Cot-waarde. Een Cot-waarde is gelijk aan Co x t, waarbij Co de startconcentratie is van het enkelstrengig DNA (in mol per liter) en waarbij t de tijd is, uitgedrukt in seconden. De Cot1/2-waarde wordt gedefinieerd als de Cot-waarde waarbij de helft van de DNA-fragmenten renatureert. Hoe complexer het DNA, hoe hoger deze waarde.

Hoe gebeurt de renaturatie bij eukaryotische cellen? Geef weer met een figuur.

Bij eukaryotische cellen kent het een ander verloop. Eerst is er een zeer snelle renaturatie, zoals te zien is bij de zeer lage Cot-waarden. Vanaf dan wordt de curve gelijkaardig aan die van E. coli (de prokaryoten), waarbij de renaturatie wel bij hogere Cot-waarden gebeurt.
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Hoe kan de homologiegraad van het DNA bepaald worden?

Met behulp van de Cot1/2-waarde kan de homologiegraad van het DNA of meer precies de lengte van het uniek DNA bepaald worden. Een nucleïnezuur bestaande uit strengen van poly-U en poly-A heeft een unieke lengte van 1 basenpaar. Dit nucleïnezuur heeft een Cot1/2-waarde van ± 2 10-6 mol/l sec. Deze strengen renatureren heel vlug. Hoe verder naar rechts, hoe trager de enkelstrengige nucleïnezuren renatureren.

Wat is niet repetitief DNA?

Het DNA dat traag renatureert (bij een hoge Cot-waarde) is niet-repetitief, bestaande uit ‘single-copy’ sequenties. Bij renaturatie zal het unieke DNA, voorgesteld als slechts één enkele kopie op een bepaald chromosoom, enkel kunnen verenigen met zijn originele complementaire partner of met hetzelfde complementaire stukje van een andere cel. Dit DNA renatureert traag, aangezien de kans het grootst is dat niet-complementaire stukjes samen worden gebracht. Het ‘single-copy’ DNA bevat o.a. de meerderheid van de structurele genen, waarvan de sequenties coderen voor polypeptiden (er is transcriptie mogelijk).

Van wat is de snelheid van renaturatie afhankelijk?

-de DNA-concentratie: hoe hoger de hoeveelheden enkelstrengig DNA, hoe sneller er dubbele DNA-strengen kunnen gevormd worden, ssDNA + ssDNA « ds DNA;
-de zoutconcentratie: hogere zoutconcentraties bevorderen de renaturatie. Kationen, zoals Na+, verlagen de elektrostatische afstoting tussen de negatief geladen fosfaatgroepen;
-de complexiteit van de DNA-molecule: hoe complexer, hoe trager de renaturatie verloopt.

Wat is een heterologe renaturatie?

Hierbij binden twee niet volledig complementaire enkelstrengen met elkaar (die weliswaar sterk op elkaar gelijken) onder minder stringente omstandigheden (qua temperatuur, ionensterkte, concentratie). Bij een temperatuur dicht bij de smelttemperatuur en bij een lage zoutconcentratie (stringente condities) zullen enkel volledig complementaire strengen met elkaar binden. Het smeltpunt van een duplex die gevormd wordt onder minder stringente omstandigheden is 1.4°C per 1 % mismatch lager in vergelijking met een dubbelstreng die gevormd wordt volgens de regels van Watson-Crick.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo