Startpagina / Samenvattingen / Class notes - Moleculaire Biotechnologie / ddpcr-microsatellieten-dna

Variatie in DNA of RNA door microsattelieten, qpCR en ddPCR

5 belangrijke vragen over Variatie in DNA of RNA door microsattelieten, qpCR en ddPCR

Wanneer is het gebruik van ddPCR in plaats van qPCR aan te raden?

ddPCR wordt aanbevolen wanneer hoeveelheden klein zijn (minder dan 100 kopieën per sample), verschillen tussen samples klein zijn (minder dan tweevoud verschil), en wanneer storingen verwacht worden zoals vervuiling in sample of minder optimale primers.

Wat is het werkingsprincipe van ddPCR?

Bij ddPCR wordt het monster opgesplitst in miljoenen druppeltjes, waarin elk een PCR-reactie plaatsvindt doordat de olie voorkomt dat de reactie met elkaar mengt. Uiteindelijk wordt gemeten hoeveel druppeltjes het product bevatten.

Wat is het verschil tussen qPCR en ddPCR met betrekking tot detectiemethode?

Bij qPCR worden de gevormde producten real-time gedetecteerd door oplichten van dubbelstrengs DNA of door inbouwen van radioactieve nucleotiden. Bij ddPCR wordt het sample verdeeld in miljoenen kleine bolletjes waarin een end point PCR plaatsvindt.

Wat is PCR op basis van polymorfisme in microsatellieten?

PCR op basis van polymorfisme in microsatellieten is een techniek die wordt gebruikt om variaties in herhaalde DNA-sequenties, microsatellieten genoemd, te detecteren. Microsatellieten zijn stukjes repetief DNA met regulerende werking. Aantal microsatellieten op een beapaalde locus is tussen individuveuen van dezelfde soort enorm variabel (sterk polymorfisch). Het helpt bij het identificeren van individuen of het onderscheiden van genetische varianten.

Hoe kan DNA of RNA zichtbaar worden gemaakt met behulp van microsatellieten?

DNA of RNA kan zichtbaar worden gemaakt door PCR-amplificatie van het specifieke DNA/RNA-gebied gevolgd door gel-elektroforese. Microsatellieten dienen als markers om de grootte van de geamplificeerde fragmenten te bepalen, waardoor ze zichtbaar zijn onder UV-licht.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

Moleculaire Biotechnologie

Bekijk samenvatting