Startpagina / Samenvattingen / Class notes - Moleculaire Biotechnologie / dna-recombinante-plasmide

GM en HG bij prokaryoten - genetische modificatie

5 belangrijke vragen over GM en HG bij prokaryoten - genetische modificatie

Wat is nodig om een recombinant plasmide te maken?

Een restrictie-enzym en DNA-ligase zijn nodig om de plasmide en DNA te knippen en aan elkaar te plakken. Het gebruik van hetzelfde restrictie-enzym zorgt voor sticky ends die complementair zijn en succesvol kunnen verbinden.

Wat is de functie van een recombinante plasmide als vector?

Een recombinante plasmide kan genen bij een bacterie invoegen als cloningsvector. Het bevat naast het nieuwe DNA ook genen voor antibioticumresistentie die nodig zijn voor selectie van getransformeerde bacteriën en groei op antibiotische voedingsbodems.

Op welke manier kan selectie van recombinante bacteriën plaatsvinden?

De selectie van recombinante bacteriën gebeurt door transformatie van de plasmide in de bacterie, vaak E. coli, die vervolgens op antibiotica bevattende voedingsbodems groeien. Bacteriën met de recombinante plasmide zouden niet blauw kleuren bij een X-gal test, terwijl anderen dit wel zouden doen.

Wat is de rol van een multiple cloning site (MCS) in een plasmide-vector?

Een vector met een MCS bevat naast het recombinante gen DNA om replicatie te starten en genen voor antibioticumresistentie. De vector kan in de MCS worden geknipt om vreemd DNA in te voegen, waarna transformatie plaatsvindt en selectie op antibioticum en eventueel X-gal kleuring.

Wat zijn gespecialiseerde plasmides en hoe kunnen ze worden gemodificeerd bij eukaryoten?

Gespecialiseerde plasmides zijn vectoren waarin een PCR-product kan worden ingevoegd. Taq-polymerase voegt A-staarten toe aan PCR-producten, die dan hybridiseren met T-staarten op de restrictieplaats van een plasmide. Dit DNA kan ook in eukaryoten worden ingebracht, waardoor genen van eukaryoten zonder bewerking kunnen worden tot expressie gebracht. Een veelgebruikte marker is URA3, een gen dat uracil kan produceren. Ura- wordt omgezet naar Ura+ met behulp van YAC. NotI is een restrictieplaats waar vreemd DNA kan worden ingevoegd.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

Moleculaire Biotechnologie

Bekijk samenvatting