Ligatie

5 belangrijke vragen over Ligatie

Hoe kan je voorkomen dat insert in twee oriëntaties in de vector past?

  • Dit kun je voorkomen door 1 kant met een enzym te knippen die blunt knipt en de andere kant sticky. Op die manier kan het insert er maar op 1 manier inpassen. Blunt en sticky kunnen namelijk niet aan elkaar worden geligeerd.
  • Door te knippen met verschillende enzymen die alleen in de richting van het ORF geligeerd kunnen worden.

Hoe voer je een ligatie reactie uit?

  1. Maak een pipetteer schema net zoals bij de digestie en pipetteer alles zoals bij digestie (dus groot volume eerst en dan als laatste het enzym ligase)
  2. Meng alles goed en incubeer 20 minuten op kamer temperatuur
  3. Na ligatie kan het op ijs worden bewaard of gelijk getransformeerd worden in de juiste bacterie stammen.

Wat is de verhouding vector en insert?

Ergens tussen 1:1 tot 1:10 vector insert ratio. Tijdens MCB21P is er gebruik gemaakt van een 2:1 (vector - insert ratio.) Dus 100ng pUC18 en 50ng pET
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Waarom wordt er 500ng pET gebruikt voor de ligatie en geen 50ng?

Ongeknipt pet is ongeveer 6000bp. Dit is ongeveer 10x groter dan het insert en daarom gebruik je dan dus ook de hoeveelheid van de ratio (1:2) x 10. Je gebruikt namelijk 100ng pUC18 (vector).

Wat is belangrijk om een stuk DNA tot uiting te laten brengen?

Dat het gen in-frame blijft en ook het startcodon aanwezig is.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo