Onderdeel 3: Westernblot + immunokleuring - Protocol immunokleuring

6 belangrijke vragen over Onderdeel 3: Westernblot + immunokleuring - Protocol immunokleuring

Wat is het verschil tussen blokbuffer met melkpoeder en/of met BSA?

Melkpoeder is goedkoper en beter beschikbaar, en kan goed gebruikt worden in experimenten waar de antistoffen hoge bindingsaffiniteit heeft en het target eiwit in hoge levels tot uiting komt, het bestaat zelf uit meerdere eiwitten. BSA is 1 enkel eiwit en is duurder om te verkrijgen. Het kan juist gebruikt worden wanneer er een lage bindingsaffiniteit is van de antilichamen aan het target eiwit en wanneer het target eiwit in lage concentraties tot uiting komt.

Wat is de reden dat er bandjes zichtbaar worden op de blot na de immunokleuring?

  1. Primaire antilichaam bindt an het eitoop van het antigeen met hoge specificiteit.
  2. Het secundaire antilichaam bindt vervolgens aan het primaire antilichaam met hoge specificiteit.
  3. Het secundaire antilichaam is gekoppeld aan een HRP. Na toevoeging met een chemisch substraat reageert dit met een reporter molecuul om een gekleurd percipitaat te produceren op de plaats van het epitoop van het antilichaam Complex.
  4. Nu is er een waarneembare kleur zichtbaar.

Wat is belangrijk in het bepalen welke primaire en secundaire antilichamen er gebruikt worden?

Primaire antilichaam moet een antilichaam zijn tegen het target eiwit. Is dit iets van de mens moet het een anti-human zijn. Het secundaire antilichaam moet dan tegen het primaire antilichaam zijn en met een juist conjugaat.
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Wat is het verschil tussen het gebruik van een polyklonaal antilichaam en een monoklonaal antilichaam?

Een polyklonaal antilichaam kan aan meerdere epitopen van een eiwit binden wat zorgt voor een hele gevoelige reactie. Hierbij wordt het risico op vals negatief kleiner, maar het risico op vals positief wel groter.

Een monoklonaal antilichaam kan aan 1 specifiek epitoop van een eiwit binden waardoor je een hele specifieke reactie opbouwt. Alleen wordt hier het risico op vals negatief groter maar het risico op vals positief wel kleiner.

Wat houd kruisactiviteit van antilichamen in?


Hierbij lijken epitopen van antigenen zoveel op elkaar dat antilichamen twee of meer verschillende epitopen herkennen. Doordat een epitoop maar 5-6 aminozuren lang is, komt dit best vaak voor. Dit is mede een oorzaak van allergische reacties.

Wat is de functie van een huishoud gen?

Een huishoud gen is een gen dat in elke cel evenveel tot expressie zou moeten komen en kan dus gebruikt worden als ladingscontrole in een immunokleuring. Deze zou dus in elke laan ongeveer dezelfde expressie moeten vertonen.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo