Crisper-Cas

17 belangrijke vragen over Crisper-Cas

In welke bacterie stam is CRISPR voor het eerst ondekt

Deze is voor het eerst ontdekt in E.coli.

Hoe lang zijn repeats in CRISPR

20-40 nucleotide

Wat wordt er gevormd wanneer de DNA repeats worden getranscribeert?

Deze vormen dan een Hairpin.
  • Hogere cijfers + sneller leren
  • Niets twee keer studeren
  • 100% zeker alles onthouden
Ontdek Study Smart

Wat is spacer DNA?

Spacer DNA zijn kleine stukjes DNA sequenties van bacteriofagen waar de bacterie ooit mee geinfecteerd is geweest. Op deze manier kan hij zichzelf beschermen tegen nieuwe infecties.

Hoe werken cas eiwitten?

Cas eiwitten herkennen faag DNA dat is geinfecteerd en knippen dit vervolgens kapot.

Hoe werkt het CRISPR-CAS systeem in bacteriën van orgine?

Wanneer een bacterie wordt geinfecteerd met een bacteriofaag, wordt dit systeem geactiveerd.
  1. De cas genen worden getranscribeert en er wordt een cas-complex gevormd.
  2. Vervolgens wordt de repat met het overeenkomstige spacer DNA getranscribeert. Dit deel heet crRNA.
  3. Vervolgens wordt dit stuk crRNA gekoppeld aan het cas-complex wat door de cas genen is gemaakt.
  4. Nu kunnen de cas eiwitten het faag DNA kapot knippen en wordt de bacterie niet ziek.

Hoe werkt het wanneer er nog geen overeenkomstig spacer DNA is in het CRISPR-CAS systeem?

Dan wordt er een klasse 1 cas eiwit gemaakt. Dit eiwit knipt een specifiek stuk van het bacteriofaag DNA en kopieert dit vervolgens in het CRISPR-systeem.

Hoe zorgt de bacterie ervoor dat het cas-systeem niet zijn eigen DNA knipt?

Dit gebeurt doordat er na elke protospacer sequentie een PAM sequentie zit. Dit is een Protospacer Adjacent Motif. Het cas9 eiwit herkent de PAM sequentie NGG in de bacteriofaag. In het CRISRPR-systeem zit er echter een andere sequentie zoals GTT. Cas9 zal dus alleen maar in een stuk DNA knippen als het de PAM sequentie van NGG bevat.

Wat is PAM (Protospacer Adjecent Motive) ?

PAM is een kort DNA sequentie (2-6 base paren) dat na het spacer DNA komt. Deze PAM sequentie is anders in faaggenoom. Waardoor het faaggenoom en het eigen CRISPER kan worden onderscheiden van elkaar.

Waarom is het spacer DNA gelooid?

Dit DNA is geplooid om in de caseiwitten te kunnen passen.

Hoe werkt het Cas9 in het laboratorium?

Het cas9 systeem is zo aangepast dat het crRNA is aangepast naar een specifiek stuk DNA dat je wilt knippen en vervolgens is het crRNA vastgemaakt aan het Tracer RNA waardoor er een zo genoemd guide RNA is ontstaan. Hierbij heb je dus het guide RNA dat zegt waar er geknipt moet worden en de Cas9 eiwit dat daadwerkelijk het DNA gaat knippen.

Wat doet het tracer RNA in dit cas9 complex?

Deze houd het crisperRNA op zijn plek.

Hoe knipt een cas9 eiwit dat door analist is gemaakt dan het DNA?


Als eerst kijk je naar de sequentie van het DNA dat je wilt knippen, hiervoor maak je vervolgens ene stuk guide RNA (trcrRNA-crRNA chimera) dat gelijk is aan dit stuk. Vervolgens heb je dus een cas9-complex dat DNA kan knippen. Wanneer je dit dan in de oplossing doet waar het target DNA in zit, zoekt het cas9 complex de juiste RNA sequentie op en knipt vervolgens dat stuk kapot. Je kan dan als analist zelf een insert toevoegen of je laat het zelf herstellen.

Hoe voeg je een insert toe met behulp van CRISPR-cas?

  1. Eerst maak je een guide RNA voor het DNA dat je wilt knippen.
  2. Vervolgens laat je door dit Cas-complex het DNA knippen.
  3. Nadat het DNA geknipt is introduceer je een nieuw stuk enkel strengs (RNA of DNA?) die fungeert als template.
  4. Vervolgens maakt de cel zelf het complementaire andere deel van het DNA om het geknipte stuk DNA weer heel te maken.

Waar moet rekening mee worden gehouden wanneer je een stuk guide-DNA aan het maken bent voor de CRISPR-CAS?

Dat je rekening houd met de PAM sequenties. Cas9 kan echter verschillende PAM sequenties herkennen.

Wat gebeurt er met het opengeknipte DNA wanneer er geen nieuw stuk DNA in wordt geplakt?

Dan ontstaat er vaak een mutatie, dit omdat de cel altijd het DNA weer aan elkaar wilt plakken. Hierdoor ontstaat er een ander eiwit of een niet functioneel eiwit en is het gen dus uitgeschakeld.

Hoe worden de korte stukjes matchen RNA die gebruikt worden in het CRISPR-Cas systeem genoemd?

Guide RNA

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

  • Een unieke studie- en oefentool
  • Nooit meer iets twee keer studeren
  • Haal de cijfers waar je op hoopt
  • 100% zeker alles onthouden
Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.
Trustpilot-logo