Samenvatting: Moleculaire Technieken

Lees hier de samenvatting en de meest belangrijke oefenvragen van moleculaire technieken

• 1 Algemene DNA technieken

  Dit is een preview. Er zijn 39 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1
  Laat hier meer flashcards zien

• wat zijn de voordelen van werken met enzymen?

  -specifiek
  -controleerbaar--> specifieke acties
  -makkelijk te krijgen

• wat is compatibele overhang?

  verschillende enzymen met verschillende herkenningssequenties, maar leveren dezelfde overhang "gewoon".

• wat is blund ligatie?

  ds ligatie--> uiteinden toevallig in elkaars buurt komen. niet zo een efficient proces

• wat is sticky ligatie?

  uiteinden sticky--> annealing--> blijft even vast zitten waardoor ligase meer tijd heeft om te binden. Meer efficient dan blunt ligatie!

• waar bestaat agarose gel uit?

  -Dissacharide van D-galactose en 3,6-anhydro-L-galactopyranose
  -onvertakte polymeren van honderden dissachariden
  -vormen helix-->supercoiling-->vezelstructuur o.i.v. H-bruggen
  -vloeibaar bij verhitting

• welk percentage agarose gebruik je voor kleine fragmenten?

  hoog%

• hoezo knippen restrictieenzymen niet de rest in de bacetrie door?

  omdat de rest gemethyleerd is

• hoe werkt miniprep: isolatie van plasmiden uit E. coli?

  1. verzwakken bacterie celwand met EDTA en lysozym
  2. lyseren van cellen met SDS en NaOH
  3. precipitatie eiwitten--> plasmiden precipiteren niet!
  4. neutraliseren van lysaat met K-acetaat
  5. plasmiden extraheren met fenol
  6. precipitatie met ijskoude ethanol (verwijderd zouten)

• hoe werkt zuivering met kolom?

  i.p.v. verwijderen van alle componenten wordt DNA selectief verwijderd

• wat moet je met RNA doen na isolatie?

  -snap freeze in vloeibare stikstof