Methods for the Seperation and Characterization of Macromolecules
8 belangrijke vragen over Methods for the Seperation and Characterization of Macromolecules
Hoe kunnen topoisomeren gedetecteerd worden in elektroforese?
Na gewoon elektroforese, waarbij verschillende tertiaire structuren worden gescheiden, moet er in loodrechte richting (dus 2D) kleurstof toegevoegd worden en de gel nog een keer gerund. Door de kleurstof worden de moleculen positiever geladen, dus zullen de positieve en negatieve topoisomeren gescheiden, omdat de eerste compacter worden (dus sneller) en de tweede minder compact.
Wat is de basis van SDS-gel elektroforese?
De SDS, of een andere detergent, breekt de quaternaire, tertiaire en secundaire structuur van het eiwit af, en vaak wordt er ook een reducerende agent (zoals mercaptoethanol) toegevoegd om de disulfide bruggen te verbreken.
Waarom migreert een groter eiwit langzamer door SDS-gel?
Een groter eiwit bindt meer SDS, dus heeft het een grotere lading en meer frictie. Beide factoren verlagen de mobiliteit.
- Hogere cijfers + sneller leren
- Niets twee keer studeren
- 100% zeker alles onthouden
Wat zijn de valkuilen voor SDS?
Als een eiwit meer of minder dan gemiddeld SDS bindt, of als een eiwit van zichzelf sterk geladen is, dan geeft dat een verkeerde indicatie van het gewicht.
Wat heeft een stacking gel tot gevolg en hoe werkt het?
Een stacking gel verbetert de resolutie van de bandjes aanzienlijk. Doordat de stacking gel een lagere concentratie (poreusiteit) en pH heeft dan de running gel zullen de eiwitten in een erg dunne, geconcentreerde laag de running gel betreden.
Wat voor technieken zijn er voor het detecteren en analyseren van componenten in een gel?
Staining is het toevoegen van kleurstof aan de componenten, waarna de hoeveelheden gemeten kunnen worden. Autoradiography kan als de componenten radioactief zijn, dan kan een print gemaakt worden van de gel op film en kan deze gescand worden. Direct radioactivity screening is scanning gelijk van de gel. Blotting gebeurt door het isoleren van de banden van de gel op ander materiaal, zoals nitrocellulose. Vervolgens kan een bindend molecuul (zoals een matchende DNA sequentie of een antilichaam) toegevoegd worden, waarna alle niet gebonden banden eraf gewassen kunnen worden.
Wat zijn de voor- en nadelen van capillaire elektroforese?
Capillaire elektroforese is veel sneller en heeft veel kleinere samples nodig. Echter, doordat het in een capillair plaats vindt is er veel meer contact tussen oplossing en oppervlakte, waardoor de geladen oppervlakte moleculen de oplossing beïnvloeden.
Wat is iso-elektrische focussing?
Iso-elektrische focussing is gebaseerd op het feit dat elk eiwit een Pi heeft. Door een pH gradiënt te vormen stoppen de eiwitten met migreren als ze op het pH komen dat gelijk is aan hun Pi. De gradiënt wordt verkregen door een mix van ampholyte met een laag moleculair gewicht aan de oplossing toe te voegen.
De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:
- Een unieke studie- en oefentool
- Nooit meer iets twee keer studeren
- Haal de cijfers waar je op hoopt
- 100% zeker alles onthouden