Samenvatting Analyse Therapeutische Eiwitten

Lees hier de samenvatting en de meest belangrijke oefenvragen van Samenvatting Analyse therapeutische eiwitten

• 1 1 Da = 1 g/mol

  Dit is een preview. Er zijn 77 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1
  Laat hier meer flashcards zien

• Hoe werkt de UV/VIS-techniek voor het meten van eiwitgehalte?

  De UV/VIS-techniek voor eiwitgehalteanalyse volgt deze stappen:
  

  • Een lichtbron zendt licht via een monochromator, die zorgt voor specifieke golflengtes.
  • Licht passeert door een aanpasbare opening en vervolgens door de cuvette met het monster.
  • Fotoweerstand registreert de intensiteit van doorgelaten licht (I tegenover I₀).
  • Signaal gaat via een versterker naar de uitgang voor weergave van absorptie.

• Welke stoffen kunnen licht opnemen in een meting met een cuvet?

  Slechts stoffen met een geconjugeerd systeem kunnen licht absorberen. Dit zijn:
  

  1. Benzeenringen
  2. Dubbele bindingen

  Alle andere verbindingen laten licht doorgaan naar de detector, die het omzet in een absorptiegetal. De metingen worden vaak verricht bij een golflengte van 280 nm.

• Wat gebeurt er onder verschillende golflengtes bij absorptiemetingen?

  Bij metingen worden de volgende situaties waargenomen:
  

  1. Onder 230 nm: veel verbindingen absorberen, waardoor specifieke metingen moeilijk zijn.
  2. Boven 280 nm: weinig verbindingen absorberen, wat leidt tot een zwak signaal.
  3. Bij 280 nm: absorptiepiek voor Trp, Tyr en een klein deel van cystine.

• Wat is de absorptiepiek voor tryptofaan (Trp) bij UV-licht?

  De absorptiepiek ligt bij een golflengte van 295 nm, specifiek voor Trp. Over het algemeen absorbeert Trp licht bij 280 nm, samen met Tyr en cystine. Phe absorbeert echter bij 260 nm.

• Hoe werkt de absorptie van licht door een molecuul?

  Een molecuul in zijn laagste energieniveau absorbeert een foton (energie), waardoor het energieniveau stijgt. Na opname verliest het molecuul energie als warmte en keert terug naar het laagste energieniveau. Dit proces maakt het mogelijk om licht op te nemen.

• Waarom kan cysteïne geen UV-licht absorberen bij 280 nm?

  Cysteïne (thiol) zelf absorbeert geen UV-licht bij 280 nm, maar cystine, die bestaat uit twee cysteïnes verbonden door een zwavelbrug, absorbeert een beetje licht. Dit benadrukt het verschil tussen thiol en cystine in absorptie-eigenschappen.

• Hoe bepaal je de totale absorptie van een eiwit?

  De totale absorptie wordt berekend door de absorptie van de verschillende aminozuren op te tellen. Dit gebeurt als volgt:
  

  1. Vermenigvuldig het aantal aminozuren Met hun respectieve absorpties.
  2. Bij 280 nm: \[ \text{absorptie eiwit} = \text{aantal Tyr} \times \text{absorptie Tyr} + \text{aantal Trp} \times \text{absorptie Trp} + \text{aantal Cystine} \times \text{absorptie Cystine}.\]

• Wat zijn quenching aminozuren en welke zijn dat?

  Quenching aminozuren zijn een groep die licht gedeeltelijk absorbeert, wat de fluorescentie kan verminderen. De aminozuren die tot deze groep behoren zijn:
  

  1. Lys
  2. Gln
  3. Asn
  4. Glu
  5. Asp
  6. His

• Hoe kan je de concentratie van een monster bepalen uit absorptie?

  De concentratie kan worden bepaald via een grafiek van bekende concentraties en hun absorpties, volgens een lineair verband. De stappen zijn:
  

  1. Meet de absorptie van bekende concentraties.
  2. Zet deze waarden in een grafiek.
  3. Gebruik de Lambert-Beer formule: \[ A = log(I_0/I) = E \times l \times c. \]

• Wat is de formule om de absorptie in UV/Vis te berekenen en welke standaardwaarden zijn gegeven?

  De absorptie wordt berekend met de formule:
  

  • \( A = \varepsilon \cdot c \cdot l \)
  • Waarbij:
  • - A = absorptie
  • - \(\varepsilon\) = molaire extinctie (M^-1·cm^-1)
  • - c = concentratie (M)
  • - l = lengte = 1 cm
  • Gegeven standaardwaarden:
  • - A = 0,5
  • - L = 1 cm