Startpagina / Samenvattingen / Class notes - Time of death / spieren-antilichaam-glycogeen

MMD Histologie

44 belangrijke vragen over MMD Histologie

Hoe is autolyse waar te nemen onder de miscroscoop?

Met een Haematoxyline-eosine kleuring zijn deze veranderingen waar te nemen doordat de kernen een lichtere blauwpaarse kleur krijgen (dan wanneer het celmembraan niet permeabel is), waardoor het cytoplasma donkerder zal worden.

Wat zijn die stinkende verbindingen dan?

Mercaptanen: organische verbinding afgeleid van een alcohol, waarin het zuurstofatoom van de alcoholgroep vervangen is door een zwavelatoom (R-SH). Door de zwavelverbinding (S-S) zijn ze sterk geurend.

Waterstofsulfide (H2S): ontstaat door de rotting van zwavelhoudende organische stoffen (eiwitten). Stinkt naar rotte eieren. Zeer giftig.

Welke twee soorten botten zijn er in de kippenpoot?

Pneumatische en medulllaire botten.

Wat zijn de pneumatische botten?

Belangrijk voor de ademhaling van de kip. Holle botten welke verbonden zijn met de ademhalingswegen (schedel, opperarmbeen, bekken, etc.).

Wat zijn de medullaire botten?

Bron van calcium voor de legkippen. Calcium is hoofdbestanddeel eischaal. Scheenbeen, dijbeen, tenen, etc.

Welke soort botten zijn vooral in de gebruikte kippenpoot aanwezig?

Medullaire botten.

Welke drie soorten spieren zijn aanwezig in het lichaam van een mens (en kip)?

Skeletspieren, gladde spieren en de hartspier.

Vertel kort wat over deze spieren.

Skeletspieren: reguliere parallelle bundels.
Gladde spieren: bundels van dunne en dikke filamenten.
Hartspier: vertakt, maar verbonden.

Op welke manier zijn niet alle spiervezels hetzelfde?

Alle spiervezels zijn niet hetzelfde, er zit namelijk een verschil in structuur en functie. Bijvoorbeeld in de snelheid waarmee deze samen kunnen trekken. De snelheid hangt namelijk af van het vermogen om Adenosinetrifosfaat (ATP) te splitsen, de manier waarop ATP geproduceerd wordt en hoe snel de spieren ‘moe’ worden. Skeletspieren worden daarom ingedeeld in twee categorieën: de fasttwitch en de slow twitch.

Wat zijn de slow twitch?

De slow twitch, type I, heeft veel haarvaten en ziet er rood uit. Ook bevat dit spiertype veel mitochondriën, welke de productie van energie bevorderen. Verder heeft de slow twitch veel myoglobine, wat belangrijk is voor de transport van zuurstof en de opslag van eiwitten in de spieren. De algemene kenmerken van de slow twitch is dat het meer zuurstof “draagt” en niet snel vermoeid raakt. Ook kan het aërobe activiteit ondersteunen. Verder kan dit spiertype langzaam samentrekken en is het in grote aantallen te vinden in de posturale spieren van de nek.

Waar bevindt glycogeen zich in de cel?

Het wordt in de vorm van granules gevonden in het cytoplasma.

Het glycogeen in de lever wordt ook gebruikt door andere organen. Het glycogeen opgeslagen in de spieren wordt alleen door spieren gebruikt. Hoe zit dit?

Omdat spiercellen het enzym glucose-6-phosphatase missen welke nodig is om glucose in de bloedbaan te brengen. De spiercellen gebruiken daarom het glucose-6-fosfaat in de glycolysis; het proces waarbij glucose wordt afgebroken tot pyrodruivensuiker.

Waar hangt de hoeveelheid glycogeen in het gehele lichaam vanaf?

Fysieke training, metabolisme en eetgewoontes.

Hoe gaat de synthese van glycogeen in zn gang?

De synthese van glycogeen heeft energie nodig in de vorm van Uridine Tri Phosphate(UTP) welke een reactie aangaat met glucose-1-phosphate. UDP-glucose word gevormd. Glycogeen wordt gesynthetiseerd van monomeren van UDP-glucose door het enzym glycogeen synthase welke de glycogeen streng langer maakt met gebonden glucose.

Hoe gaat het afbreken van glycogeen?

Het afbreken van glycogeen wordt gedaan door het splitsen van niet reducerende eindes van de streng door het enzym glycogeen phosphorylase. Zo worden monomeren van glucose-1-phosphate geproduceerd welke worden omgezet in glucose-6-phosfate(G6P). De G6P monomeren hebben drie mogelijke routes: G6P kan doorgaan met de glycolysis en worden gebruikt als brandstof, G6P wordt gebruikt om NADPH en 5-koolstofsuikers te produceren of G6P kan in de lever en nieren terug worden gedefosforyleerd naar glucose.

Wat gebeurt er na de dood met glycogenolyse?

Uit onderzoek blijkt dat in intacte spieren glycogenolyse na de dood heel langzaam intreed.

Welke drie actine-isovormen hoofdgroepen zijn er te onderscheiden?

Alfa, Bèta en Gamma. De spieren bevatten Alfa actine en zijn belangrijk voor de spiercontractie. De bèta en Gamma actine komen bij de meeste celtypen voor en zorgen voor interne spierbeweging.

Uit welke twee delen bestaat het zenuwstelsel? (kip en mens)

Het zenuwstelsel van de kip bestaat uit twee delen net zoals bij de mens, namelijk het centraal zenuwstelsel (CNS) en het autonome zenuwstelsel (ANS).

Waar is het CNS verantwoordelijk voor? En de ANS?

De CNS is verantwoordelijk voor de vrijwillige acties van het lichaam, zoals verplaatsing en vliegen. Het ANS is verantwoordelijk voor de coördinatie van de onvrijwillige handelingen van de organen, ingewanden, bloedvaten en klieren.

Hoe gaat het samentrekken van spieren in de hersenen te werk?

Om spieren te laten samentrekken zenden motorische neuronen een signaal naar de spiercellen.

Wat importeren ze en waarom?

Ze importeren vele metabolieten die nodig zijn voor celmetabolisme en ze exporteren toxines en afval.

Wat is een immunohistologische kleuring?

Immunohistochemie is een techniek die is berust op de herkenning van eiwitten op een cel. Deze herkenning word gedaan door antilichamen. Antilichamen zijn eiwitten die worden geproduceerd door B-lymfocyten in respons tot een antigeen. De antilichamen bestaan uit twee identiek zware ketens en twee lichte ketens waarvan elk een constant gebied en een variabel gebied bevat. De aminozuur sequentie van het variabele gebied heeft de eigenschappen die de aviditeit(hoe goed de binding is) en de affiniteit(specifiek) van een antilichaam met het antigeen bepalen.

Welk antilichaam wordt voor dit onderzoek gebruikt?

Het antilichaam dat in het onderzoek wordt gebruikt is monoclonal Anti-actin. Gemaakt in muis.

Wat is een monoclonaal antilichaam?

Een monoklonaal antilchaam betekent dat het geproduceerd is in een cellijn van een dierlijke host, en produceert een enkel antilichaam dat herkend wordt door één epitoop van een antigeen.

Wat is het primaire antilichaam en wat het secundaire?

Anti-actin is het primaire antilichaam en zal het specifieke epitoop herkennen en binden. Om het herkende epitoop aantoonbaar te maken wordt er gebruik gemaakt van een secundair antilichaam dat gericht is tegen de host van het primaire antilichaam zodat ook het secundaire antilichaam bind aan het primaire antilichaam. Het primaire antilichaam Anti-actin is geproduceerd in een muis, het secundaire antilichaam zal anti-muis zijn.

Hoe maak je het antigeen zichtbaar?

De zichtbaarheid van het antigeen wordt aanzienlijk verbeterd dor voorbehandeling met het antigen retrieval reagent dat de eiwit dwarsverbindingen breekt die gevormd zijn bij de formaline fixatie en daarbij verborgen antigeen gebieden zichtbaar maakt. De weefselsecties worden gekookt in 10mM citraatbuffer met een pH van 6,0 voor 10-20 minuten. Deze methode wordt toegepast omdat antilichamen lichtelijk kunnen binden aan niet relevante eiwitten die soortgelijke epitopen hebben als het target eiwit. De citraatbuffer zorgt ervoor dat niet relevante reactieve plaatsen waar primaire en secundaire antilichamen aan kunnen binden worden geblokkeerd.

Waarom weefsels inbedden in paraffine?

Uitdroging voorkomen. Paraffine gaat geen reacties aan met de cel- en weefselonderdelen. Beter plakjes snijden.

Hoe coat je objectglaasjes?

10 minuten in organocyclane, dan spoelen in aceton, spoelen in demi-water en in de stoof zetten om te drogen.

Wat is deparaffineren? En welke stappen zitten erin?

Paraffine weghalen, zorgt ervoor dat het weefsel in het waterige milieu komt, zodat het gekleurd kan worden.
Histoclear 2x, 100% alcohol, 95% alcohol, 70% alcohol, demiwater. Alles 5 minuten.

Wat kleurt wat bij een HE kleuring?

Collageen ---------- Vaag roze
Spierweefsel ------ Donker roze
Cytoplasma -------- Rood/paars
Celkern-------------- Blauw
Erytrocyten---------- Donker rood

Wat zijn de stappen van het immunoprotocol?

1. Deparaffineren (histoclear en 100% 20 minuten)
2. Endogene peroxidase remmen met 0.3% H2O2/methanol
3. Spoelen in PBS
4. Antigen retrievel met citraatbuffer
5. Spoelen in PBS
6. Blocken met 1% BSA/PBS
7. Primaire antilichaam
8. Overnacht of een uur bij kamertemperatuur
9. Spoelen in PBS
10. Secundair antilichaam
11. Spoelen in PBS
12. Peroxidase kleurmedium (DAB A en B)
13. Spoelen in PBS
14. Haematoxyline
15. Spoelen met kraanwater
16. Oplopende alcoholreeks
17. Histoclear
18. Neomount + dekglaasje

Wat is endogene peroxidase en waarom blokken?

Een enzyn welke in elke cel zit. Wordt geblockt omdat het zal reageren met de DAB wat leidt tot fals positieven.

Waarom de BSA stap?

Blokkeren van aspecifieke bindingen.

Wat is een AZAN kleuring?

Een complex trichroom methode voor de algemene histologie. Wordt gebruikt voor de detectie van collageenvezels in weefsels.

Nuclei – Red

Muscle – Orange

Collagen – Blue

Wat zijn de stappen van een AZAN?

Maak een 1% Azocarmine B oplossing.
Maak een 5% Phosphotungstic Acid oplossing (PTA).
Maak een Aniline blauw/Orange G oplossing.

1. Maak de Azocarmine B oplossing en plaats in 56 graden stoof.
2. Deparaffineer de coupes.
3. Plaats in de voorverwarmde Azocarmine B oplossing.
4. Spoel in demiwater.
5. Plaats in 5% Phosphotungstic acid.
6. Spoel in demiwater.
7. Plaats in de Aniline blauw/Orange G oplossing.
8. Dehydrateer en bedek.

Wat doen de kleuringen in de AZAN?

Azocarmine B: rode kleurstof kleuring.

PTA: bindt aan collageen, fibrine en vezels van het bindweefsel. Het vervangt de anionen van kleurstoffen van deze stoffen (ontkleurt selectief).

Aniline blauw/Organge G: AB wordt gebruikt om collageen te kleuren en Orange G voor de spieren.

Waarom een AZAN kleuring?

Omdat deze de afbraak van collageen zou kunnen laten zien.

Hoe ontstaat autofage celdood?

Door het ontbreken van nutriënten.

Wat zijn de resultaten van AZAN?

In dag 1 is het collageen intact. Dag 7 is het minder zichtbaar en in dag 10 is het nog vaag zichtbaar.

Wat zijn de resultaten van de Actine kleuring?

De gladde spiercellen zijn bruin aangekleurd. Er is geen verandering te zien in de loop der dagen.

Hoe zijn de cijfers gegeven?

Ieder heeft individueel de plaatjes een cijfer gegeven en later is dit samengevoegd.

Zou dit een betrouwbaar systeem zijn met die cijfers?

Nee, want er is niet naar meerdere omstandigheden gekeken. De cijfers zijn gegeven, maar dit kan nooit in een 'echt' onderzoek gebruikt worden.
Bijvoorbeeld wanneer het in het water lag, zag onze dag 10 er misschien daarbij wel uit als dag 2.

Wat is een PAS-myofibril kleuring?

Wordt gebruikt om vroege laesies (weefsel afwijkingen) op te sporen in dwarsgestreept spierweefsel (dus de skeletspieren).

Hoe betrouwbaar is dit hele onderzoek?

Niet. Er moeten veel meer invloeden getest worden. Daarnaast hadden we graag een goede elektrostimulatie uitgevoerd (dus dat er echt resultaat te meten was). Ook kan beter een hele kip gebruikt worden (stukken kip bederven sneller want huid is 1e barriere, deze valt al weg op de wonden). Ook kan er niets gezegd worden over hoe het er uit ziet na dag 10. Het is gewoon een heel beperkt onderzoek.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

Time of death

Bekijk samenvatting

Een unieke studie- en oefentool
Nooit meer iets twee keer studeren
Haal de cijfers waar je op hoopt
100% zeker alles onthouden

Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.

Studiemateriaal generieke omslagafbeelding